玉米花粉特異性表達(dá)基因ZM401轉(zhuǎn)化百合的研究.pdf

1、百合是世界四大切花之一，具有花大，色彩豐富，花姿優(yōu)美的優(yōu)點，深受人們的喜愛。但是百合存在花粉污染問題，嚴(yán)重影響花朵的觀賞質(zhì)量，還給人們的生活帶來了不便。本文使用基因工程技術(shù)，以三種百合為材料，通過建立不同外植體的高頻再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系，將玉米(Zea mays)花藥特異性表達(dá)基因ZM401入百合基因組，為獲得無花粉百合新材料奠定基礎(chǔ)。
　　以3種百合‘P1’、‘P2’、‘X’的無菌苗為材料，通過器官直接發(fā)生途徑建立高頻再生體系

2、。以‘P1’無菌苗葉柄為外植體，在附加3.0mg/L BA和0.2mg/L NAA的MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，再生芽分化率達(dá)100％，再生芽增殖系數(shù)為2.27;以‘P2’無菌苗鱗片為外植體，在附加1.5mg/L BA和0.2mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，再生芽分化率達(dá)100％，再生芽增殖系數(shù)為3.08;以‘X’無菌苗鱗片為外植體，在附加0.2mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，再生芽分化率達(dá)100％，再生芽增殖系數(shù)為1.7

3、6。1/2MS+NAA0.5適合三個品種的生根培養(yǎng)。
　　以‘P2’、‘X’無菌苗鱗片為受體材料，潮霉素Hy為選擇抗生素，頭孢青霉素Cef和羧卞青霉素Cb為抑菌抗生素建立百合遺傳轉(zhuǎn)化受體體系。通過試驗篩選確定‘P2’鱗片外植體遺傳轉(zhuǎn)化選擇抗生素為Hy，選擇壓為40mg/L;‘X’鱗片外植體遺傳轉(zhuǎn)化選擇抗生素為Hy，選擇壓為80mg/L。Cb適合作為‘P2’鱗片外植體轉(zhuǎn)化的抑菌抗生素，最適濃度為300mg/L; Cef適合作為‘X’

4、鱗片外植體轉(zhuǎn)化的抑菌抗生素，最適濃度為300mg/L。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從玉米中克隆到的花藥特異性表達(dá)基因ZM401轉(zhuǎn)化百合‘P2’和‘X’兩個品種。試驗結(jié)果顯示，‘P2’鱗片外植體預(yù)培養(yǎng)3d，菌液濃度OD600=0.4～0.6，侵染5min，共培養(yǎng)4d遺傳轉(zhuǎn)化率最高，值為10‰;轉(zhuǎn)化試驗共獲得9株轉(zhuǎn)化ZM401基因的百合株系?！甔’鱗片外植體預(yù)培養(yǎng)2d，菌液OD600=0.4～0.6，侵染5min，共培養(yǎng)4d遺傳轉(zhuǎn)化率最高，值為6