miR-140-5p通過(guò)靶向調(diào)節(jié)TGFBR1和FGF9抑制肝細(xì)胞癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，特別是在中國(guó)。其每年全球新發(fā)病例數(shù)為74.8萬(wàn)，而死亡病例數(shù)為69.5萬(wàn)。死亡率高居所有男性惡性腫瘤的第二位，女性惡性腫瘤的第六位。近十年來(lái)由于肝切除技術(shù)已有顯著提高，肝癌的手術(shù)切除率也顯著增加，術(shù)后并發(fā)癥與死亡率也已顯著降低。然而，目前來(lái)說(shuō)肝癌的總體療效仍難以令人滿意，其5年生存率長(zhǎng)期徘徊于30％-40％，甚至更低。而肝癌術(shù)后5年的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)

2、移率則高達(dá)70％以上。究其原因，肝癌術(shù)后發(fā)生的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是影響肝癌長(zhǎng)期生存的根本障礙所在。因此，深入研究探索肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的的分子機(jī)制，篩選與研發(fā)相關(guān)的關(guān)鍵干預(yù)靶點(diǎn)，對(duì)于肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的防治具有十分重要的理論意義與實(shí)際價(jià)值。
　　最新的研究顯示microRNA（miRNA）在這一過(guò)程中起著關(guān)鍵性的作用?，F(xiàn)已弄清miRNA是一類(lèi)高度保守的、長(zhǎng)度為17～25nt的單鏈非編碼RNA分子，可通過(guò)與特定靶基因mRNA互補(bǔ)位點(diǎn)的結(jié)合在轉(zhuǎn)錄后水平

3、調(diào)控靶基因的表達(dá)，具有廣泛的生物學(xué)功能。隨著研究的深入，越來(lái)越多的證據(jù)顯示miRNA與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究以孤立性大肝癌（Solitary large hepatocellular carcinoma，SLHCC）為切入點(diǎn)，比較不同復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移潛能的孤立性大肝癌、小肝癌(SHCC)和結(jié)節(jié)性肝癌(NHCC)的miRNAs表達(dá)譜及其表達(dá)差異。我們初步發(fā)現(xiàn)miR-140-5p在上述三種不同類(lèi)型的肝癌中均呈顯著性低表達(dá)(p＜0.05)，而

4、且SLHCC和SHCC中miR-140-5p的表達(dá)水平均顯著高于NHCC(P＜0.05)。這提示我們miR-140-5p可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。因此，在本研究中我們以miR-140-5p作為研究目標(biāo)，深入研究其在肝癌中的表達(dá)水平、生物學(xué)作用及其作用機(jī)制。
　　本研究首先通過(guò)采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了120例肝癌組織(HCC)及相應(yīng)的癌旁非瘤肝組織(ANLT)中miR-140-5p的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在肝癌組織中miR-

5、140-5p呈顯著低表達(dá)(P＜0.05)，而且其低表達(dá)與肝癌的臨床病理特和肝癌的不良預(yù)后具有顯著相關(guān)性(P＜0.05)。接著我們又檢測(cè)了六種肝癌細(xì)胞系中miR-140-5p的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平均明顯低于正常肝細(xì)胞系L02(P＜0.05)。為了研究miR-140-5p在肝癌發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的作用，我們構(gòu)建了過(guò)表達(dá)miR-140-5p的肝癌細(xì)胞系，并通過(guò)劃痕愈合、Transwell侵襲小室、MTT生長(zhǎng)曲線、克隆形成和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞

6、周期等一系列功能學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-140-5p可在體外抑制肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和增殖能力。繼之采用裸鼠原位成瘤模型在體內(nèi)證實(shí)miR-140-5p可在體內(nèi)同樣發(fā)揮抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和增殖的作用。鑒于miRNA必須通過(guò)調(diào)控其靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)水平才能發(fā)揮其生物學(xué)功能，我們又先后采用腫瘤多信號(hào)通路篩選、生物信息學(xué)預(yù)測(cè)、雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、Western-blot、免疫組化(IHC)和一系列體外功能學(xué)實(shí)驗(yàn)方法證實(shí)TGFBR1和FGF9是mi