番茄抗黃瓜花葉病毒病遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、東北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文番茄抗黃瓜花葉病毒病遺傳轉(zhuǎn)化的研究姓名：陳穎申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：王興智2002.5.1A b s t r a c tA p r o c e d u r ef o rp r o d u c i n gt r a n s g e n i ct o m a t op l a n tr e s i s t a n tt oc u c u m b e rm o s a i c v i r u s ( C

2、 M V ) m e d i a t e db y A g r o b a c t e r i u m T u m e f a c i e n s s t r a i nL B A 4 4 0 4 c a r r y i n g a b i n a r y v e c t o r p R - AG D D ，w h i c h c o n t a i n sk a n a m y c i n —r e s i s t a n c eg

3、e n ea n d t h ec u c u m b e rm o s a i cv i r u sr e p l i c a s eg e n ew i t l l G D Dd e l e t i o n ．i s d e s c r i b e d ．A g r o b a c t e r i u m T u m e f a c i e n s s t r a i nL B A 4 4 0 4c a r r y i n g ab

4、 i n a r yv e c t o rp T O K 2 3 3w h i c hc o n t a i n s t h eG U Sr e p o r t e rg e n ea n dak a n a m y c i n - r e s i s t a n c eg e n eN P T l lw a se m p l o y e df o ro p t i m i z i n gt h et r a n s f o r m a

5、 t i o ns y s t e mw h i c h w a s e v a l u a t e db y t h eG U S ( p- g l u c u r o n i d a s e ) t r a n s i e n te x p r e s s i o n ．T od e t e r m i n et h eo p t i m u m c o n d i t i o n sf o rA g r o b a c t i u

6、 mi n f e c t i o n ，c o t y l e d o nw a su s e da st h ee x p l a n tw h i c hh a dt h eh i g h e r t r a n s g e n i ce f f i c i e n c ya n d r e g e n e r a t i n gf r e q u e n c y t h a n h y p o c o t y l ．T h er

7、 e l a t i v es m a l le x p l a n ts i z eW a s s u p e r i o rt ot h el a r g eo n e si nt e r m so fc a l l i i n d u c t i o n ．I th a sa l s ob e e nf o u n dt h a tt h ec a l l u s p r o l i f e r a t e dm o r ew h

8、 e n c u l t u r e du n d e r l i g h tt h a ni nt h ed a r k ．n l eo p t i m u m i n o c u l a t i o na n dC O ·c u l t i v a t i o n d u r a t i o n s w e r e 8 - 1 0 m i n u t e s a n d 2 d a y s r e s p e c t i

9、v e l y ．F u r t h e r m o r e ，t h e i n f e c t i o n f r e q u e n c y w a s g e n e r a l l y h i g h e r w h e n t h eC O —c u l t i v a t i o n m e d i u mW a sa tp H5 ．0 a n dt h e b a c t e r i u m c o n c e n t

10、r a t i o nO D 6 0 0 = 0 ．1 5 w a s a p p l i e d ．n e a d d i t i o n o fA S r 5 0 ／2t o o l ／L ) t o t h eC O - c u l t i v a t i o nm e d f u m i n c r e a s e dt h ei n f e c t i o nf r e q u e n c y ．F i e l ds p r

11、a yt e s ts h o w e d t h a t t h e t r a n s g e n i c t o m a t op l a n t s w e n r e s i s t a n t t o 10 0m g ／LK a n a m y c i n w e l l t h e w i l d t y p ew a s n o t ．K e y w o r d ：T o m a t o A g r o b a c t