哺乳細(xì)胞暴露于化學(xué)致癌劑MNNG應(yīng)答基因鑒定.pdf

1、本研究利用基因芯片技術(shù)，研究人羊膜上皮FL細(xì)胞暴露于烷化劑MNNG后細(xì)胞基因組表達(dá)的改變，用來探索化學(xué)致癌物誘發(fā)哺乳動(dòng)物細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)的分子機(jī)制，并為尋找人群接觸環(huán)境致癌物MNNG后的早期生物標(biāo)志物提供線索。研究?jī)?nèi)容包括兩部分：其一為FL細(xì)胞暴露于不同濃度MNNG后基因表達(dá)譜的劑量-效應(yīng)關(guān)系研究，其二為暴露于MNNG后不同時(shí)間點(diǎn)基因表達(dá)譜的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系研究?！　⊥ㄟ^實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)L細(xì)胞分別暴露于0.2μM、1.0μM、10.0μMMNN

2、G后，相對(duì)于對(duì)照組DMSO處理，三個(gè)處理濃度分別有70，112，146個(gè)，共281個(gè)基因表達(dá)發(fā)生改變。FL細(xì)胞暴露于1.0μMMMNNG后，在暴露后3小時(shí)、12小時(shí)及24小時(shí)，相對(duì)于對(duì)照組DMSO處理，分別有1425、643、675個(gè)，共2408個(gè)基因表達(dá)發(fā)生改變，3個(gè)時(shí)間表達(dá)改變2倍以上的基因分別為200、151、145個(gè)基因，共422個(gè)基因。對(duì)用芯片篩選到的應(yīng)答基因，按照其參與生物過程，主要包括：轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)基因，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因，

3、細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因，細(xì)胞骨架相關(guān)基因，蛋白質(zhì)合成相關(guān)基因，免疫反應(yīng)相關(guān)基因，代謝相關(guān)基因以及其他功能已知和未知基因。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用高通量的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，4采用ABI公司的低密度表達(dá)譜芯片，對(duì)FL細(xì)胞暴露于MNNG后的劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系篩選的應(yīng)答基因進(jìn)行驗(yàn)證。目前，在劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系研究中，已分別有12個(gè)和11個(gè)基因表達(dá)改變得到驗(yàn)證。在已被驗(yàn)證的23個(gè)基因中，有5個(gè)上調(diào)，18個(gè)基因下調(diào)，其中包括

4、與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因，如ID1、ZNF302、NFAT5、EGR1和CEBPG，與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因，如CCNE2、CYR61、1IL8、IGF1R等，還包括與蛋白質(zhì)合成相關(guān)基因，如COG5、RANBP2TRA1等基因，還有其他如參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫反應(yīng)等基因。 由此可見，用高通量的基因芯片技術(shù)結(jié)合Real-timePCR技術(shù)能夠有效研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞暴露于MNNG的應(yīng)答反應(yīng)基因的全貌。細(xì)胞在烷化劑MNNG暴露后發(fā)生了廣泛而復(fù)雜的反