培養(yǎng)細(xì)胞對糖代謝異常環(huán)境的基因應(yīng)答研究.pdf

1、目的：通過研究體外培養(yǎng)細(xì)胞在嚴(yán)格控制的條件下對微環(huán)境內(nèi)、外糖代謝基本物質(zhì)含量變化的基因應(yīng)答，深入探索發(fā)生在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的糖生物學(xué)調(diào)控機(jī)制。方法：建立穩(wěn)定的正常人二倍體成纖維細(xì)胞與各物種血管內(nèi)皮細(xì)胞的無糖培養(yǎng)環(huán)境，為單因素分析實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)；在模擬生理?xiàng)l件激活細(xì)胞膜糖轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)后，精確改變培養(yǎng)環(huán)境內(nèi)基本糖代謝物質(zhì)以及關(guān)鍵中間產(chǎn)物的含量，了解上述細(xì)胞的生物學(xué)行為應(yīng)答；運(yùn)用DNA分子雜交原理與抑制性PCR技術(shù)構(gòu)建樣本間差異表達(dá)基因的cDNA

2、克隆文庫。結(jié)結(jié)論：高濃度的葡萄糖或其活性代謝產(chǎn)物對培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的毒性作用與其對轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控有關(guān)，氨基己糖生物合成途徑產(chǎn)物對糖尿病視網(wǎng)膜微血管并發(fā)癥的出現(xiàn)具有很強(qiáng)的刺激能力，血管內(nèi)皮細(xì)胞對毒性代謝產(chǎn)物的基因應(yīng)答可能在糖網(wǎng)病的發(fā)生機(jī)制中占據(jù)核心地位。作為連接蛋白質(zhì)翻譯后乙酰胺糖基化修飾體系的底物合成和糖綴合物分解產(chǎn)物進(jìn)入三羧酸循環(huán)產(chǎn)生能量之間的唯一調(diào)節(jié)通道，磷酸氨基葡萄糖脫氨旁路對保持能量代謝和糖生物學(xué)調(diào)節(jié)平衡具有重大意義。本研究結(jié)合編碼