構(gòu)建全生物化組織工程血管的種子細(xì)胞及血管基質(zhì)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、人們長(zhǎng)期以來(lái)為了尋求一種最佳的血管替代物，嘗試了自體動(dòng)靜脈、人工材料、生物材料等多種方法，但這些方法均存在一些不足。組織工程概念的提出及技術(shù)的逐步成熟使在體外培植具有生物活性，結(jié)構(gòu)、功能與自體血管相類(lèi)似的人工血管成為可能。本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞和豬主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為種子細(xì)胞，脫除豬主動(dòng)脈血管壁細(xì)胞獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，為下一步構(gòu)建組織工程血管提供細(xì)胞和支架材料。 目的：1.獲取內(nèi)皮祖細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，為構(gòu)建組織工程血管提供種子細(xì)胞；

2、 2.制備脫細(xì)胞血管基質(zhì)，為構(gòu)建組織工程血管提供支架材料。 方法：1.無(wú)菌條件下采集豬外周血，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液(相對(duì)密度為1.077g/ml)，密度梯度離心分離外周單個(gè)核細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)，獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)并傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下(IM)形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)(IHC)鑒定；無(wú)菌條件下取豬胸主動(dòng)脈，采用改良組織塊法分離培養(yǎng)豬主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)(IHC)鑒定。 2.采用

3、胰蛋白酶、低滲溶液、化學(xué)除垢劑法處理豬胸主動(dòng)脈來(lái)獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，并對(duì)萁進(jìn)行組織學(xué)觀察和生物學(xué)性能測(cè)試及保存實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：1.成功的培養(yǎng)出內(nèi)皮祖細(xì)胞并傳代。剛分離出的單個(gè)核細(xì)胞小且圓，瑞氏染色呈藍(lán)紫色，至生長(zhǎng)6天時(shí)呈現(xiàn)內(nèi)皮樣改變，倒置顯微鏡下內(nèi)皮細(xì)胞呈“鵝卵石”形態(tài)，CD31，CD34，F(xiàn)lk-1和vWF免疫熒光染色為陽(yáng)性，以及FITC-ulex-lectin和Dil- acLDL免疫熒光均陽(yáng)性；成功分離培養(yǎng)出平滑肌細(xì)胞，呈典

4、型的“峰一谷”狀，平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白抗體(+)。 2.成功獲得脫細(xì)胞血管基質(zhì)，H-E染色和掃描電鏡觀察可見(jiàn)脫細(xì)胞組織基質(zhì)中細(xì)胞已全部脫除，膠原纖維和彈性纖維保持原來(lái)的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，呈條索狀排列，細(xì)胞已全部去除，基底面完整，透射電鏡下可見(jiàn)膠原纖維橫紋；其膠原蛋白含量和力學(xué)性狀與新鮮組織無(wú)明顯差別。 結(jié)論：1.所培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞可為組織工程血管的研究提供細(xì)胞來(lái)源； 2.所制備的脫細(xì)胞血管基質(zhì)可為組織工程血管的