組織工程方法構(gòu)建全生物化血管移植物的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：血管移植物已經(jīng)常規(guī)應(yīng)用于治療心血管疾病，但是自體動靜脈來源不足，數(shù)量有限，不適用于大口徑血管和多次移植手術(shù)，合成材料作為血管替代物容易形成血栓，尤其不適用于小血管。鑒于這些問題，很多研究試圖利用生物材料和自體細(xì)胞構(gòu)建出組織工程血管。脫細(xì)胞基質(zhì)是一種重要的材料，具有較低的免疫原性，良好的生物相容性，較強(qiáng)的機(jī)械和生理特性。內(nèi)皮細(xì)胞可以分泌抗血栓因子，對于維持血管功能具有不可替代的作用。本課題試圖用組織工程的方法，體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞

2、(endothelialprogenitorcells，EPCs)，種植到脫細(xì)胞基質(zhì)上，構(gòu)建出組織工程血管，并移植到細(xì)胞供體山羊體內(nèi)，研究是否可以用于構(gòu)建血管移植物并希望通過此項(xiàng)研究為組織工程血管臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1.抽取山羊外周血，通過密度梯度法培養(yǎng)的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，摸索體外培養(yǎng)條件，并應(yīng)用電鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測EPCs的生長特性、細(xì)胞表面標(biāo)志物和定向分化能力。 2.觀察去垢劑、胰蛋白酶、機(jī)

3、械法等對山羊頸動脈去細(xì)胞的影響，探討血管組織工程生物支架的最佳制備方法。 3.將制備的脫細(xì)胞血管支架植入山羊皮下，及在體外種植EPCs，觀察脫細(xì)胞血管支架的生物相容性。 4.將內(nèi)膜種植有EPCs的全生物化血管植入山羊體內(nèi)，觀察其替換血管的通暢情況，對制備的組織工程血管進(jìn)行評估。 結(jié)果: 1.從山羊外周血中分離培養(yǎng)EPCs，其在外周血單核細(xì)胞中比例、形態(tài)以及細(xì)胞表面標(biāo)記等基本符合文獻(xiàn)報(bào)道，并通過CD31、C

4、D34、KDR以及透射電鏡對不同時(shí)期的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，具有分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力，證明本研究分離的細(xì)胞即為內(nèi)皮祖細(xì)胞。 2.酶消化、機(jī)械法、化學(xué)除垢劑去細(xì)胞效果確實(shí)，其中反復(fù)凍溶后核酸酶消化在所有方法中最為快捷，可作為血管組織工程支架材料快速制備方法。 3.所制備的脫細(xì)胞血管支架具有良好的生物相容性。 4.術(shù)后12w、24w、40w行血管造影和核磁共振檢測結(jié)果顯示，造影劑充盈良好，未見有造影劑外滲；大部分移植

5、血管造影劑充盈圖象與正常血管無明顯差異，顯影的移植血管周圍未見造影劑滲漏；出現(xiàn)1例血管顯影顯示血管阻塞，另有2例血管顯影示血管腔出現(xiàn)狹窄，核磁共振顯示下肢股動脈1支略有狹窄。 結(jié)論： 1.組織工程學(xué)構(gòu)建血管的方法是可行的。 2.EPCs具有分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力，可作為血管組織工程的種子細(xì)胞。 3.反復(fù)凍溶后核酸酶消化，可作為血管組織工程支架材料快速制備方法。 4.制備的組織工程血管在動物實(shí)