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文檔簡介
1、研究背景:
經皮冠狀動脈介入治療(PCI)是目前治療冠心病的有效手段之一,但是再狹窄(RS)仍是制約這一技術應用的主要問題。血管壁的機械性損傷所致的增殖效應是造成PCI 再狹窄的主要原因,多種生長因子、細胞因子、粘附分子等參與其病理生理過程。轉錄因子FKHRL-1(Forkhead Transcription Factor in rhabdomyosarcoma-like 1,FoxO3a)作為Forkhead 轉錄因子家
2、族的重要成員,主要通過轉錄調控信號傳導途徑在細胞的生長發(fā)育、細胞分化、代謝、凋亡和免疫等方面起著重要作用。基因治療是目前預防血管再狹窄較為有效的方法之一,而選擇合適的基因和載體是基因治療再狹窄的關鍵之一。本實驗旨在通過將目的基因FoxO3a 轉染損傷后的血管平滑肌細胞(VSMC),觀察其對損傷后血管平滑肌細胞增殖能力的影響。
目的:
(1)構建大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型;
(2)完成脂質體Li
3、pofectmaine2000 介導的質粒HA-Foxo3a TM轉染大鼠球囊損傷后血管平滑肌細胞;
(3)觀察轉染前后血管平滑肌細胞增殖能力的變化情況。
方法:
體外培養(yǎng)急性球囊損傷后SD 大鼠頸總動脈血管平滑肌細胞,并用脂質體Lipofectmaine2000 介導質粒HA-Foxo3a TM 轉染,應用免疫組化法鑒定細胞表型、MTT 法檢測細胞增殖、RT-PCR 和Westernblot
4、方法檢測基因和蛋白的表達。
結果:
(1)成功建立大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型并培養(yǎng)出不同損傷時間點的血管平滑肌細胞;且損傷后血管平滑肌細胞增殖能顯著升高(P<0.01);
(2)頸動脈急性損傷后血管平滑肌細胞的磷酸化FoxO3a 蛋白表達明顯升高(P<0.01),且細胞的增殖能力較正常血管平滑肌細胞顯著增高(P<0.01);
(3)脂質體介導質粒HA-Foxo3a TM 基因轉染
5、至損傷后血管平滑肌細胞后,細胞增殖能力顯著降低(P<0.01)。
結論:
成功建立SD 大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型,損傷后可見血管平滑肌細胞增殖能力顯著增強。球囊損傷后的血管平滑肌細胞內發(fā)生FoxO3a 顯著磷酸化,且該磷酸化過程發(fā)生迅速、持續(xù)時間短,磷酸化的高峰期出現在球囊損傷后12 小時以內。球囊損傷后,血管平滑肌細胞增殖能力的變化與FoxO3a 的磷酸化可能存在著相關性,提示FoxO3a 的磷酸化可能
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