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1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文靶向EBV-LMP1的脫氧核酶放射增敏的分子機(jī)制姓名:馬小倩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師:曹亞;孫侖泉20090501博士學(xué)位論文 中文摘要1 .靶向L M P l 的脫氧核酶D Z l 對(duì)L M P l 表達(dá)的抑制及對(duì)細(xì)胞周期的影響通過(guò)W e s t e r nb l o t t i n g 檢測(cè)靶向L M P l 脫氧核酶D Z l 能夠抑制L M P l 表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能引起
2、L M P l 陽(yáng)性細(xì)胞發(fā)生S 期阻滯,后者是放療增敏的重要特征。我們以細(xì)胞周期網(wǎng)路通路為切入點(diǎn),圍繞G 1 /S 以及G 2 /M 兩個(gè)細(xì)胞周期監(jiān)測(cè)點(diǎn),研究靶向E B V —L M P I脫氧核酶所致重要細(xì)胞周期分子的改變,從細(xì)胞周期素C y c l i n s ,細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶C D K s ,以及相關(guān)C D K I s 三個(gè)層次研究S 期阻滯的分子機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)脫氧核酶通過(guò)抑制L M P l 的表達(dá),不同程度地下調(diào)C y
3、c D l 、C D K 4 、C y c E 、C D K 2 的表達(dá),通過(guò)C 0 一I P 及免疫沉淀激酶活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能夠C y c D l /C D K 4 的相互作用及激酶活性,抑制下游R B /E 2 F 通路;另一方面,脫氧核酶抑制L M P l 的表達(dá),引起c d c 2 活性磷酸化水平的降低,通過(guò)E L I S A 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能夠使C y c B /c d c 2 復(fù)合物活性降低,使細(xì)胞停留在G 2 期不再
4、繼續(xù)行進(jìn),兩方面造成了S 期阻滯這一現(xiàn)象。W e s t e r nb l o t t i n g 檢測(cè)細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)節(jié)因子C D K I 和P 5 3 發(fā)現(xiàn),脫氧核酶抑制L M P l 表達(dá)后,并沒(méi)有引起這些分子的表達(dá)上升,反而有不同程度的下降。因?yàn)槲覀冋J(rèn)為靶向L M P l 脫氧核酶能引起L M P l 陽(yáng)性細(xì)胞發(fā)生S 期阻滯現(xiàn)象,這種S 期阻滯的分子機(jī)制涉及到G I /S 及G 2 /M 兩個(gè)細(xì)胞監(jiān)測(cè)點(diǎn)通路多種蛋白分子及激酶活性的
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