靶向EBV-LMP1的脫氧核酶放射增敏的分子機(jī)制.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文靶向EBV-LMP1的脫氧核酶放射增敏的分子機(jī)制姓名：馬小倩申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：曹亞;孫侖泉20090501博士學(xué)位論文 中文摘要1 ．靶向L M P l 的脫氧核酶D Z l 對L M P l 表達(dá)的抑制及對細(xì)胞周期的影響通過W e s t e r nb l o t t i n g 檢測靶向L M P l 脫氧核酶D Z l 能夠抑制L M P l 表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能引起

2、L M P l 陽性細(xì)胞發(fā)生S 期阻滯，后者是放療增敏的重要特征。我們以細(xì)胞周期網(wǎng)路通路為切入點，圍繞G 1 ／S 以及G 2 ／M 兩個細(xì)胞周期監(jiān)測點，研究靶向E B V —L M P I脫氧核酶所致重要細(xì)胞周期分子的改變，從細(xì)胞周期素C y c l i n s ，細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶C D K s ，以及相關(guān)C D K I s 三個層次研究S 期阻滯的分子機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)脫氧核酶通過抑制L M P l 的表達(dá)，不同程度地下調(diào)C y

3、c D l 、C D K 4 、C y c E 、C D K 2 的表達(dá)，通過C 0 一I P 及免疫沉淀激酶活性實驗發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能夠C y c D l ／C D K 4 的相互作用及激酶活性，抑制下游R B ／E 2 F 通路；另一方面，脫氧核酶抑制L M P l 的表達(dá)，引起c d c 2 活性磷酸化水平的降低，通過E L I S A 實驗發(fā)現(xiàn)脫氧核酶能夠使C y c B ／c d c 2 復(fù)合物活性降低，使細(xì)胞停留在G 2 期不再

4、繼續(xù)行進(jìn)，兩方面造成了S 期阻滯這一現(xiàn)象。W e s t e r nb l o t t i n g 檢測細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)節(jié)因子C D K I 和P 5 3 發(fā)現(xiàn)，脫氧核酶抑制L M P l 表達(dá)后，并沒有引起這些分子的表達(dá)上升，反而有不同程度的下降。因為我們認(rèn)為靶向L M P l 脫氧核酶能引起L M P l 陽性細(xì)胞發(fā)生S 期阻滯現(xiàn)象，這種S 期阻滯的分子機(jī)制涉及到G I ／S 及G 2 ／M 兩個細(xì)胞監(jiān)測點通路多種蛋白分子及激酶活性的