日本血吸蟲表膜蛋白SjOST48的初步研究.pdf

1、日本血吸蟲病是我國重點防控的人畜共患寄生蟲病，對我國人民的身體健康和畜牧生產(chǎn)造成了重大損害。防治實踐表明吡喹酮只針對成蟲有效且不能避免重復(fù)感染，單靠吡喹酮藥物治療不能有效控制血吸蟲病，因此，篩選、鑒定高效且安全的血吸蟲病疫苗成為血防工作者們的努力方向。體被表膜蛋白被證明是血吸蟲潛在的疫苗和藥物靶標，具有很好的研究價值。本實驗室前期在開展日本血吸蟲體被蛋白組研究時鑒定到了SJCHGC01743蛋白，本文對該蛋白編碼基因進行了克隆、表達，對

2、其基本特性和生物學功能進行了初步的研究。
　　為了鑒定日本血吸蟲SJCHGC01743基因并評估其重組蛋白作為新的血吸蟲病候選疫苗抗原的潛力，本研究利用PCR技術(shù)首次擴增了該基因，獲得了1248bp的cDNA序列。同源性分析結(jié)果顯示，該基因為日本血吸蟲寡糖轉(zhuǎn)移酶OST48亞基，命名為SjOST48。實時定量PCR分析顯示SjOST48在檢測的童蟲和成蟲各個期別蟲體中均有轉(zhuǎn)錄，其中在28d蟲體中的轉(zhuǎn)錄水平最高，在42d雌蟲中的轉(zhuǎn)錄水

3、平顯著高于雄蟲。構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-SjOST48，并在大腸桿菌中成功表達，重組蛋白rSjOST48分子量約50kDa。應(yīng)用重組蛋白rSjOST48免疫BALB/c小鼠制備免疫血清，Western-blot分析表明rSjOST48具有較好的免疫原性。間接免疫熒光試驗表明SjOST48蛋白主要分布于蟲體體被，少量分布于實質(zhì)。ELISA檢測結(jié)果表明rSjOST48能誘導產(chǎn)生較高的特異性IgG、IgG1和IgG2a抗體。兩

4、次動物免疫保護試驗結(jié)果表明SjOST48分別誘導小鼠產(chǎn)生了21.58％-32.62％(P＜0.05)的減蟲率和50.94％-57.61％(P＜0.01）的肝臟蟲卵減少率。
　　為了探究SjOST48基因的生物學功能，本研究利用RNAi技術(shù)對該基因進行了初步研究。根據(jù)SjOST48核苷酸序列，設(shè)計了4對針對該基因的特異性siRNAs，通過浸泡法進行體外篩選，獲得一體外干擾效果較好的siRNAs(siRNA-713)，與無關(guān)對照組相比

5、，siRNA-713浸泡組SjOST48的轉(zhuǎn)錄水平下降了40.00％。利用尾靜脈注射法將siRNA-713導入感染血吸蟲的小鼠體內(nèi)進行體內(nèi)干擾實驗，結(jié)果顯示，7次注射siRNA-713后，與無關(guān)對照組相比，siRNA-713干擾組小鼠體內(nèi)的蟲荷數(shù)減少了29.50％,肝臟蟲卵數(shù)減少了30.08％，表明日本血吸蟲表膜蛋白SjOST48可能對血吸蟲的生長發(fā)育具有重要作用。
　　本研究為深入探討日本血吸蟲SjOST48基因的生物學功能及篩