DEC1-LXRβ在帕金森病中的作用.pdf

1、研究背景:帕金森病(PD)是一種神經(jīng)退行性疾病，其顯著的病理特點(diǎn)之一是黑質(zhì)密質(zhì)部大量的多巴胺能神經(jīng)元的缺失。DEC1是一種堿性螺旋環(huán)螺旋蛋白(BHLH)轉(zhuǎn)錄因子，它在小鼠中的同源基因被稱為Stra13，而在大鼠中被稱為Sharp2。DEC1參與了機(jī)體各種生物學(xué)現(xiàn)象，比如神經(jīng)元的生成。肝X受體β(LXRβ)是核受體超家族基因的一名成員，而且LXRβ選擇性的在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，對(duì)于整個(gè)生命中大腦皮層的發(fā)生以及多巴胺能神經(jīng)元的生存都是具有重

2、要意義的。
　　目的:整體和細(xì)胞水平研究DEC1在帕金森病發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:1.利用野生型和MPTP誘導(dǎo)的帕金森病模型小鼠進(jìn)行對(duì)比，并結(jié)合DEC1基因敲除小鼠進(jìn)行整體動(dòng)物的研究;2.利用免疫組織化學(xué)法研究Stra13(DEC1)和LXRβ在野生型小鼠和帕金森病模型小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元的表達(dá)情況，以及DEC1基因敲除小鼠中多巴胺能神經(jīng)元損傷情況，和多巴胺能神經(jīng)元LXRβ的表達(dá)情況;3.培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，給予

3、兩個(gè)濃度的MPP+刺激，檢測(cè)DEC1和LXRβ及下游靶基因的蛋白表達(dá)水平;4.培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，進(jìn)行DEC1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)和DEC1過(guò)表達(dá)加給藥實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)LXRβ及下游靶基因的蛋白表達(dá)水平;5.培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，在基礎(chǔ)狀態(tài)和過(guò)表達(dá)DEC1的情況下分別給予4個(gè)濃度的MPP+刺激，檢測(cè)MPP+對(duì)細(xì)胞存活率和凋亡情況的影響;6.MPTP誘導(dǎo)的帕金森病模型小鼠，整體情況下檢測(cè)Stra13和LXRβ的蛋白表達(dá)水平;7.培養(yǎng)原代小鼠的原代星

4、形膠質(zhì)細(xì)胞，給予兩個(gè)濃度的MPP+神經(jīng)毒素刺激，檢測(cè)Stra13和LXRβ的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.野生型小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元中能檢測(cè)到Stra13、LXRβ的表達(dá);2.MPTP誘導(dǎo)的帕金森病模型小鼠，免疫熒光雙染結(jié)果顯示中腦區(qū)多巴胺能神經(jīng)元較野生型小鼠相比呈現(xiàn)缺失狀況，而且Stra13和LXRβ在該區(qū)多巴胺能神經(jīng)元中的表達(dá)量也明顯下降;分離中腦組織，Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果:TH的表達(dá)量下降約50％(P＜0.05

5、)，中腦組織中Stra13和LXRβ蛋白水明顯增高。由于腦組織中膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量和體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于神經(jīng)元細(xì)胞，中腦多巴胺能神經(jīng)元Stra13表達(dá)降低，猜測(cè)在中腦膠質(zhì)細(xì)胞中Stra13表達(dá)增加;
　　3.與野生型小鼠比較，DEC1基因敲除小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷情況嚴(yán)重，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少;LXRβ在多巴胺能神經(jīng)元的表達(dá)量也顯著下降;
　　4.SH-SY5Y細(xì)胞，MPP+可劑量依賴性地降低DEC1的表達(dá)量，當(dāng)濃度達(dá)到100μM時(shí)，

6、約下降50％(P＜0.01); LXRβ以及下游的ABCG1、ABCG5、ABCG8表達(dá)量也均以劑量依賴的形式下降;與DEC1表達(dá)降低呈正相關(guān)。其結(jié)果與整體結(jié)果一致;
　　5.SH-SY5Y細(xì)胞，過(guò)表達(dá)DEC1之后，LXRβ及其靶基因ABCG1、ABCG5、ABCG8的蛋白水平的上調(diào)，而給予MPP+處理后，可明顯降低DEC1表達(dá)，同時(shí)過(guò)表達(dá)DEC1可以對(duì)MPP+所導(dǎo)致的LXRβ、ABCG1、ABCG5、ABCG8的蛋白水平的下調(diào)產(chǎn)

7、生部分逆轉(zhuǎn)作用;MPP+對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，當(dāng)濃度達(dá)到400μM時(shí)，細(xì)胞抑制率約為40％(P＜0.001)，但是過(guò)表達(dá)DEC1能明顯減輕MPP+所致神經(jīng)元損傷，當(dāng)濃度達(dá)到400μM時(shí)，細(xì)胞抑制率降低至約25％(P＜0.01); MPP+對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞有促凋亡作用，而過(guò)表達(dá)DEC1可以減輕MPP+對(duì)多巴胺能神經(jīng)元造成的損傷;
　　6.Stra13在原代小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，MPP+可劑量依賴地上調(diào)Stra13