甘蔗梢腐病菌T-DNA插入突變體庫的構建和分析.pdf

1、甘蔗梢腐病是世界范圍內重要的經濟作物真菌性病害，其病原真菌為輪枝鐮孢菌(F.verticillioides)和層出鐮刀菌(F.proliferatum)。通過農桿菌介導的遺傳轉化分別構建了這兩個鐮刀菌種（菌株CNO-1和YN41）的突變體庫，并利用高效TAIL-PCR和菌落形態(tài)對突變體庫進行鑒定。
　　結果分別構建了庫容量為195的YN41突變體庫和庫容量為956的CNO-1突變體庫。從兩個突變體庫中分別隨機挑選6個轉化子，進行P

2、CR鑒定，結果均為陽性。通過菌落特征和致病性篩選YN41和CNO-1突變體庫，鑒定出生長速度減慢且致病力下降突變體1個(A5)，生長速度減慢且致病力不變突變體1個(C8)，生長速度加快且致病力增強突變體2個(A1、A2)，菌絲變濃密且菌絲疏水性變弱突變體1個(A3);采用高效TAIL-PCR對這些轉化子的T-DNA側翼序列進行擴增，獲得了A1、A2、A3突變體的T-DNA側翼序列，通過BLAST鑒定到其插入位點（下游）基因，這些基因分別