細(xì)胞因子基因多態(tài)性與HBV感染預(yù)后的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景和目的 乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是世界范圍內(nèi)主要的感染性疾病之一，慢性感染者約3.5億，從無癥狀攜帶、急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎到肝硬化、肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)，形成復(fù)雜的疾病譜。持續(xù)感染的形成和疾病進程與多種因素有關(guān)，如年齡、性別、宿主的免疫狀態(tài)(嬰幼兒感染/成人感染)、HBV基因型、其他病毒重疊感染等。然而，分離分析和雙生子研究提示，宿主遺傳

2、因素對HBV感染后疾病的表型起著關(guān)鍵作用。而且，HBV感染呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)差異，東亞地區(qū)HBV的感染率、慢性攜帶率、疾病嚴(yán)重程度、流行程度等明顯高于歐美地區(qū)。因此，宿主因素，尤其是宿主基因影響HBV感染和疾病進程的諸多階段。 近幾年，越來越多的研究證實，不同的遺傳背景對人類疾病在易感性、療效和轉(zhuǎn)歸等方面已產(chǎn)生影響。其中，單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)是人類DNA變異中最常見的形

3、式，約占其90％，被認(rèn)為是最有價值的遺傳標(biāo)記，可為將來藥物研發(fā)、篩選、發(fā)展藥物基因?qū)W，以及根據(jù)不同地區(qū)人群遺傳特點制訂的藥物“個體化”治療方案提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。因此，探討慢性HBV感染的宿主遺傳易感性，將為我們從另一個角度認(rèn)識HBV感染及慢性化機制提供新的線索，并為臨床防治提供新的、合理的策略。HBV感染是一個極其復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)過程，其中多種細(xì)胞因子在HBV感染后病毒清除的免疫機制中起著重要作用。本課題選擇重要的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)因子如

4、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、干擾素-γ(interferon-gamma，IFN-γ)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)和IL-18等細(xì)胞因子基因作為慢性HBV感染的侯選基因，研究中國漢族人TNF-α基因啟動子區(qū)、IFN-γ基因第一內(nèi)含子、IL-10基因啟動子區(qū)和IL-18基因啟動子區(qū)或編碼區(qū)SNP與慢性HBV感染預(yù)后的關(guān)聯(lián)，并分析IL-18基因啟動子-607C

5、/A、-137G/C位點和編碼區(qū)105A/C位點SNP與其表達量的關(guān)系，探討它們在HBV感染及感染后疾病進程中的作用，為慢性HBV感染的防治提供理論依據(jù)。 方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)和限制性片段長度多態(tài)性分析(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)技術(shù)檢測TNF-α基因啟動子-238G/A、-308G/A、-857C/T

6、和-863C/A位點，IL-10基因啟動子-1082G/A、-819T/C、-592A/C位點和IL-18基因編碼區(qū)105A/C位點SNP；采用PCR結(jié)合序列特異性引物(sequencespecificprimers，SSP)檢測IFN-γ基因第一內(nèi)含子+874位點、IL-18基因啟動子-607C/A和-137G/C位點SNP；并用RT-PCR和ELISA檢測培養(yǎng)的外周血單個核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearc

7、ell，PBMC)中IL-18mRNA的水平和上清液中IL-18的含量。 結(jié)論 通過對TNF-α、IFN-γ、IL-18和IL-10基因SNP與中國漢族人HBV感染預(yù)后的關(guān)聯(lián)研究，初步得出如下結(jié)論：(1)中國漢族人慢性乙型肝炎易感性與TNF-α基因啟動子-308G/A、-863C/A位點多態(tài)性有關(guān)，其中TNF-α-308GA、-863CA基因型攜帶者患慢性乙型肝炎風(fēng)險相對較小。(2)IFN-γ基因第一內(nèi)含子+874位點多

8、態(tài)性與慢性HBV感染有關(guān)，提示該位點多態(tài)性可能在決定個體HBV感染遺傳易感性方面有一定意義。(3)雖然IL-10基因啟動子-1082G/A、-819T/C、-592A/C位點多態(tài)性與中國漢族人群對HBV易感性及感染后的病毒血癥水平無顯著相關(guān)性；但IL-10啟動子-819T/C和-592A/C位點基因多態(tài)性與HBV感染后的肝臟炎癥反應(yīng)有關(guān)。(4)IL-18基因啟動子-607、-137位點和編碼區(qū)105位點SNP與慢性HBV感染有關(guān)，其中I