PPARγ依賴的信號通路介導依澤替米貝對血管平滑肌細胞膽固醇蓄積的抑制作用.pdf

1、目的：觀察依澤替米貝對平滑肌細胞膽固醇蓄積的影響，并初步探討PPARγ依賴的信號通路介導依澤替米貝對血管平滑肌細胞膽固醇蓄積的抑制作用。 方法：首先以原代培養(yǎng)大鼠主動脈平滑肌細胞（VSMCs）為研究對象，以20mg/L Chol:MβCD作用于細胞48h，造成荷脂細胞模型。然后以不同濃度的依澤替米貝（3μmol/L，10μmol/L，30μmol/L）處理細胞24h，或以30μmol/L依澤替米貝分別處理細胞不同時間（0h，6h

2、，12h，24h，48h），用HPLC檢測細胞內總膽固醇（TC）、游離膽固醇（FC）的含量，用油紅O染色觀察細胞荷脂情況，用Western 印跡法檢測caveolin-1、nSREBP-1、LXRα蛋白的表達, 用免疫熒光法檢測caveolin-1及ABCA1的蛋白表達，用RT-PCR檢測PPARγ和ABCA1的mRNA變化。最后將帶有PPARγ siRNA的質粒轉染到VSMCs內，同樣以20mg/L Chol:MβCD孵育細胞48h和

3、以30μmol/L依澤替米貝作用24h，再檢測細胞內TC、FC的含量，檢測caveolin-1、LXRα蛋白的表達及觀察ABCA1的mRNA變化。 結果：不同濃度依澤替米貝（3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L）作用于VSMCs源性荷脂細胞24h，濃度依賴性地降低細胞內TC、FC的含量，30μmol/L作用最強； 30μmol/L依澤替米貝作用于VSMCs源性荷脂細胞不同時間（0h，6h，12h，24h，48h），

4、同樣降低細胞內TC、FC和膽固醇酯（CE）的水平，其最佳作用時間在24h時。同時抑制nSREBP-1的表達，明顯增加細胞caveolin-1、LXRα蛋白的表達水平及ABCA1 mRNA表達水平，但PPARγ的mRNA水平沒有明顯變化。用攜帶有PPARγ SiRNA的質粒pSliencer 2.1-U6 hygro轉染VSMCs后，細胞內的TC、FC 、CE水平較30μmol/L依澤替米貝組有所升高，且caveolin-1、LXRα蛋白