microRNA-183下調(diào)EGR1對(duì)人滑膜肉瘤細(xì)胞株SW982耐藥、侵襲、遷移能力的影響.pdf

1、目的:探討微小RNA-183(miR-183)對(duì)人滑膜肉瘤細(xì)胞株SW982耐藥、侵襲、侵襲能力的影響，并分析早期生長反應(yīng)因子1(EGR1)作為其潛在靶點(diǎn)的可能。
　　方法:采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染miR-183 mimics/inhibitors/N.C，上調(diào)/下調(diào)SW982細(xì)胞中miR-183的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)及Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染效率;噻唑藍(lán)(MTT)法檢測轉(zhuǎn)染后SW982細(xì)胞增值率; MTT法測定轉(zhuǎn)染24h、48

2、h、72h后10 tmmol/l多柔比星對(duì)SW982滑膜肉瘤細(xì)胞抑制情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率及轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期的改變，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞凋亡的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)比較轉(zhuǎn)染前后SW982細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化。Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后各組中EGR1含量的變化;雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證EGR1是否為miR-183靶基因。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-183 mimics/inh

3、ibitors/N.C后，SW982細(xì)胞中miR-183的含量明顯發(fā)生改變;與正常組相比mimics組miR-183含量明顯增加(P＜0.001)，inhibitors組miR-183含量明顯降低(P＜0.001)，N.C組miR-183含量明顯無明顯變化(P=0.637)。在細(xì)胞增殖、周期、凋亡實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染前后SW982細(xì)胞株中的細(xì)胞增殖、周期、凋亡無明顯變化。在耐藥實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染后，多柔比星作用24h后mimics組（0.00

4、51±0.022）抑制率較正常組（0.0903±0.039）明顯減低（P=0.003）;inhibitors組（0.1351±0.062）抑制率較正常組（0.0281±0.033）明顯增高(P=0.009)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在遷移實(shí)驗(yàn)中，mimics組和inhibitor組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為108.61±4.94個(gè)、54.36±4.03個(gè)(P＜0.001);在侵襲實(shí)驗(yàn)中，mimics組和inhibitor組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為

5、79.13±5.77個(gè)，20.87±3.17個(gè)(P=0.036)。EGR1表達(dá)分析中，轉(zhuǎn)染48h后mimics組中EGR1表達(dá)較正常組明顯減低(P＜0.001);inhibitors組中EGR1表達(dá)較正常組明顯增高(P=0.012);雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明，miR-183可特異性靶向EGR1基因。
　　結(jié)論:miR-183參與調(diào)控SW982細(xì)胞耐藥、侵襲及遷移;EGR1可能是其潛在靶點(diǎn)。miR-183對(duì)SW982細(xì)胞的增值、周