氧化應激在脫氧雪腐鐮刀菌烯醇致HepG2細胞DNA損傷中的作用.pdf

1、目的：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇是一種單端孢霉烯毒素，廣泛的存在于發(fā)霉的小麥，大麥，玉米等糧谷類農作物及其食品中。污染率較高，目前認為DON是存在于赤霉病小麥中的主要天然毒素之一，是世界范圍內糧食飼料的污染物之一，對人畜構成很大危害，已被聯(lián)合國糧農組織和世界衛(wèi)生組織確定為最危險的自然發(fā)生食品污染物。 國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC）將DON對人類的致癌性

2、劃歸為列第三類，即現(xiàn)有證據(jù)尚不能就其對人類致癌性進行分類。體外試驗顯示，DON可引起染色體畸變。DON能引起質脂過氧化產物丙二醛（MDA）的產生。肝臟是DON代謝的主要部位。有研究顯示DON具有遺傳毒性，這有可能與自由基和活性氧（ROS）的產生有關。因此，本研究試探討DON引起的DNA損傷是否與氧化應激有關。本研究選用一種代謝完全的人類來源的肝腫瘤細胞株HepG2細胞，它不僅保持了人正常肝實質細胞的許多功能，還保留了一系列生物轉化過程中

3、的Ⅰ相和Ⅱ相酶，是檢測外來化合物遺傳毒性的理想細胞系。 本研究選用HepG2細胞作為實驗系統(tǒng)，探討脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的DNA損傷作用及可能的機制，旨在為評估脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對人類健康的危害性提供實驗室依據(jù)。 方法：以HepG2細胞作為試驗系統(tǒng)。通過單細胞凝膠電泳（SCGE）試驗檢測細胞DNA損傷，在彗星試驗的基礎上用抗氧化劑羥基酪醇（HT）做DNA保護。為探討其可能的氧化性機制，以2’，7’-二氫二氯熒光素（DCFH）

4、法測定細胞內活性氧（ROS）水平，用硫代巴比妥酸反映物（TBARS）測定法檢測細胞內脂質過氧化水平，以免疫組化方法檢測細胞內8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的表達水平。 結果：3．75μM～30μM的DON作用于HepG2細胞后，引起細胞的DNA鏈斷裂，DNA的遷移距離明顯增加，且呈劑量依賴關系。用25、50、100μM的HT預處理HepG2細胞30min后，DNA的遷移距離明顯減少，DON引起的DNA損傷幾乎完全被防止，且隨著

5、HT劑量增加，DNA的損傷程度減小，呈劑量依賴關系，提示DON誘發(fā)HepG2細胞的DNA損傷預氧化應激有關。15μM～60μM的DON作用于HepG2細胞1h可引起細胞內ROS表達水平的顯著增加。3．75μM～15μM的DON作用與細胞24 h后，TBARS增多。7．5μM～60μM的DON作用與細胞3h后，細胞內8-OHdG表達水平增強。均呈劑量依賴關系。 結論：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇可致HepG2細胞DNA損傷，其作用機制可能與