脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和定向分化能力與p16ink4a基因表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、研究背景:
　　神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative diseases)是威脅人類晚年生活質(zhì)量的主要疾病之一，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，暫無有效治療方法。來源豐富、易獲取的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived mesenchymalstem cells，ADSCs)的自體移植在神經(jīng)退行性疾病的治療中具有極大的應(yīng)用潛能。但隨著哺乳動(dòng)物年齡增長而出現(xiàn)的干細(xì)胞功能減退是自體干細(xì)胞移植所面臨的一個(gè)難題。抑癌基因p16i

2、nk4a與人ADSCs的衰老密切相關(guān)、且在神經(jīng)退行性疾病中存在過度表達(dá)，阻斷p16ink4a基因可能有助于改善生理性衰老對(duì)干細(xì)胞功能的抑制。為提高自體移植ADSCs對(duì)神經(jīng)退行性疾病的療效，需對(duì)ADSCs是否存在增齡性衰老進(jìn)行驗(yàn)證、對(duì)p16ink4a基因在老年個(gè)體中ADSCs中表達(dá)變化進(jìn)行觀察。
　　本實(shí)驗(yàn)組推測:隨著年齡增長ADSCs的細(xì)胞增殖及定向分化能力減退，細(xì)胞中p16ink4a基因表達(dá)增多，p16ink4a基因可能影響AD

3、SCs的增殖與定向分化能力。
　　目的:
　　體外分離培養(yǎng)青年和老年SD大鼠脂肪組織中脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)，觀察兩組細(xì)胞形態(tài)、增殖能力、向神經(jīng)細(xì)胞定向分化能力、衰老情況等方面的差異，并比較兩組細(xì)胞中p16ink4a基因表達(dá)。
　　方法:
　　取SD大鼠的腹股溝和腹膜后脂肪，分離體外培養(yǎng)青年大鼠及老年大鼠ADSCs，觀察形態(tài)并進(jìn)行傳代。取第3代細(xì)胞測定流式細(xì)胞術(shù)鑒定標(biāo)志物CD11b、CD29、CD90，M

4、TT比色法描繪生長曲線探查其增殖能力并比較兩組差別。通過兩步誘導(dǎo)法誘導(dǎo)ADSC向神經(jīng)細(xì)胞方向分化，免疫熒光法檢測分化后細(xì)胞Nestin、GFAP、Tubulin的表達(dá)情況，比較兩組細(xì)胞分化能力的區(qū)別。對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行衰老染色以觀察干細(xì)胞衰老情況，Western blot、realtime PCR測定不同年齡的兩組ADSCs中p16ink4a基因的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:
　　1.從大鼠的脂肪組織中可成功提取ADSCs，并在含血清

5、培養(yǎng)中能夠連續(xù)傳代并穩(wěn)定增殖。青年組大鼠ADSCs增殖能力較老年組大鼠強(qiáng)(P＜0.05)。提取的ADSCs強(qiáng)烈表達(dá)CD29、CD90，低表達(dá)CD11b。
　　2.經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后，ADSCs可分化成為神經(jīng)元樣細(xì)胞，表達(dá)Nestin、不表達(dá)GFAP及Tubulin，較之青年組大鼠ADSCs老年組細(xì)胞神經(jīng)分化能力明顯減弱(P＜0.05)。
　　3.老年組大鼠ADSCs中衰老細(xì)胞比例明顯較青年組高(P＜0.05)且p16ink4a基