BMP-7、TGF-β1在cGVHD狼瘡樣小鼠腎組織的表達及雷公藤多苷聯(lián)合白芍總苷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種具有多系統(tǒng)損害及多種自身抗體的自身免疫性疾病，可累及全身各組織器官。狼瘡腎炎（LN）是SLE最重要的臨床表現(xiàn)之一，腎臟病變的嚴重程度是直接影響SLE預(yù)后的重要因素。近年研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）與多種腎病的發(fā)生、發(fā)展有明顯相關(guān)性，可促進腎小球系膜細胞和內(nèi)皮細胞增生以及細胞外基質(zhì)（ECM）的合成和積聚，從而加重腎小球硬化和間質(zhì)纖維化。本研究在建立慢性移植物抗宿主?。╟GVHD））狼瘡小鼠

2、模型的基礎(chǔ)上，觀察其腎組織中BMP-7及TGF-β1的表達情況及TG聯(lián)合TGP的干預(yù)作用，探討B(tài)MP-7、TGF-β1在LN病理過程中的可能作用和TG聯(lián)合TGP治療LN的可能機制以及TGP聯(lián)合TG的增效減毒作用，為臨床中藥有效成分配伍治療LN提供實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴（C57BL/6J×DBA/2）F1（即B6D2F1）雌性雜交鼠，建立慢性移植物抗宿主?。╟GVHD）狼瘡模型。將成模小鼠隨機分6組：模型組（LN group）

3、、潑尼松組（Pred group）、來氟米特組（LEF group）、雷公藤多甙組（TG group）、白芍總苷組（TGP group）、雷公藤多苷+白芍總苷組（TG+TGP group）。另設(shè)正常對照組（Control group）。⑵在造模后第9周，正常對照組、模型組給予生理鹽水灌胃，其他各組分別給予潑尼松、來氟米特、雷公藤多苷、白芍總苷、雷公藤多苷和白芍總苷灌胃治療，共4周。⑶在造模及用藥前后觀察小鼠的一般情況。⑷在治療第4周末，

4、各組小鼠全部處死。處死前1d置于代謝籠內(nèi)收集24小時尿標(biāo)本，檢測24小時尿蛋白排泄率（UPE）。⑸從心臟取血，離心，-50℃保存，檢測尿素（BUN）、肌酐（SCr）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）。⑹摘取肝臟制成組織勻漿，檢測超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）。⑺取腎臟組織進行固定、石蠟包埋，經(jīng)HE染色、PAS染色和Masson染色，光鏡下觀察腎臟組織病理變化并進行對比。⑻采用

5、免疫組織化學(xué)染色法檢測BMP-7、TGF-β1在腎組織的表達，并采用彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)對其表達量進行半定量分析。⑼所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，所得結(jié)果以均數(shù)士標(biāo)準差（X±s）表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。方差分析前進行方差齊性檢驗，采用LSD法進行組間兩兩比較。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗，以P<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：①與正常對照

6、組相比，LN組小鼠的UPE、BUN、SCr均顯著增高（P<0.01）。與模型組相比，Pred組、LEF組、TG組、TGP組、TG+TGP組均可有效降低LN小鼠的UPE、BUN、SCr，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。同時TG+TGP組與TG組比較，上述指標(biāo)均有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。②與正常對照組、LN組相比，LEF組、TG組小鼠的ALT、AST均顯著增高（P<0.01）。與TG組相比，TG+TGP組的

7、ALT、AST均顯著降低（P<0.01）。③與正常對照組、LN組相比，LEF組、TG組小鼠的SOD、GSH均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與TG組相比，TG+TGP組的SOD、GSH均顯著增高（P<0.01）。④病理結(jié)果顯示，正常對照組小鼠腎臟未見明顯病變。LN組小鼠腎小球系膜增寬、基底膜增厚、腎間質(zhì)淋巴細胞浸潤。各治療組小鼠腎臟病變均較LN組有所減輕，其中以TG+FGP組病變最輕。⑤BMP-7在正常對照組小鼠腎組織中高度表達

8、，主要分布于腎小管及腎間質(zhì)，而在腎小球內(nèi)基本無表達。LN組小鼠腎小管及腎間質(zhì)BMP-7的表達明顯減少，各治療組較LN組小鼠腎小管及腎間質(zhì)BMP-7的表達增強。⑥正常對照組小鼠僅在少數(shù)腎小管有微弱TGF-β1表達。LN組小鼠腎小球系膜細胞、腎小管上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、腎小球和腎間質(zhì)浸潤的炎癥細胞胞質(zhì)均有TGF-β1顯著表達。各治療組TGF-β1的表達均減弱。⑦各組小鼠腎組織中BMP-7表達與UPE、BUN、SCr水平均呈顯著負相關(guān)，r分

9、別為-0.814、-0.555、-0.766（P均<0.01）。各組小鼠腎組織中。TGF-β1表達與UPE、BUN、SCr水平均呈顯著正相關(guān)，r=0.800、0.684、0.740（P均<0.01）。⑧各組小鼠腎組織中BMP-7與TGF-β1的表達呈顯著負相關(guān)，r=-0.665（P<0.01）。
　　 結(jié)論：⑴BMP-7是維持腎臟功能穩(wěn)定的一個重要因子，BMP-7在狼瘡腎炎中具有與TGF-β1相反的作用，其表達水平下降可能參與了

10、狼瘡腎炎的發(fā)生、發(fā)展。⑵雷公藤多苷、雷公藤多苷聯(lián)合白芍總苷對cGVHD狼瘡腎炎小鼠有顯著的治療作用；上調(diào)BMP-7表達、下調(diào)TGF-β1表達可能是其腎臟保護作用的重要機制。⑶雷公藤多苷聯(lián)合白芍總苷對cGVHD狼瘡腎炎小鼠的治療作用以及對BMP-7、TGF-β1表達的干預(yù)作用優(yōu)于單用雷公藤多苷，提示白芍總苷與雷公藤多苷有明顯的協(xié)同/增效作用。⑷雷公藤多苷可導(dǎo)致肝臟損傷，其機制與氧化損傷有關(guān)；白芍總苷對雷公藤多苷所致的肝損傷具有保護作用，抗