腎移植術(shù)后患者PBMCs中NF-κB的活性和TNF-αmRNA的表達(dá)研究.pdf

1、核因子-κB(nuclea factor-kappaB，NF-κB)是由Sen等于1986年首次從B細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的蛋白因子。靜息狀態(tài)下，NF-κB與抑制蛋白IκB結(jié)合成三聚體而存在于細(xì)胞質(zhì)中。激活后，NF-κB轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與相應(yīng)的靶基因啟動(dòng)子或增強(qiáng)子上的基序結(jié)合，調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄活性。
　　 腎移植是目前治療終末期腎最有效的方法，近年來(lái)取得很大的進(jìn)展。隨著免疫抑制治療

2、的不斷完善和手術(shù)技術(shù)的日趨成熟，術(shù)后存活率明顯提高。然而，由于按體重給藥，術(shù)后發(fā)生排斥和感染的情況并不少見(jiàn)。這可能與個(gè)體的免疫水平相關(guān)。
　　 近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB的激活不僅參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展的許多環(huán)節(jié)，而且已經(jīng)成為腫瘤治療的又一靶標(biāo)。而在炎癥與免疫方面，NF-κB作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，也起著重要的中介作用，已經(jīng)證實(shí)它與許多炎癥性疾病密切相關(guān)，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病等。在器官移植方面，特別是腎

3、移植方面的研究，腎臟移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)時(shí)，NF-κB被激活在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已有相關(guān)報(bào)道。在腎移植術(shù)后發(fā)生感染病人方面的臨床研究，還未曾報(bào)道。
　　 腫瘤壞死因子-α(Tumour necrosis factor，TNF-α)是移植物排斥反應(yīng)中調(diào)節(jié)因子，可以介導(dǎo)多種炎癥及免疫反應(yīng)。在移植排斥反應(yīng)中的重要作用已被公認(rèn)，但是其作用機(jī)制尚未完全明了。之前的研究主要是用放射免疫方法檢測(cè)血漿中可溶性TNF-α，而檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TNF-α的mRNA

4、表達(dá)鮮有報(bào)道。
　　 目的：
　　 通過(guò)對(duì)腎移植術(shù)后病人外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性檢測(cè)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的mRNA的表達(dá)檢測(cè)，研究NF-κB和TNF-α與腎移植術(shù)后病人個(gè)體免疫狀態(tài)水平的相關(guān)性。旨在探討NF-κB和TNF-α是否能成為腎移植術(shù)后病人免疫狀態(tài)的檢測(cè)指標(biāo)。
　　 方法：
　　 1用密度梯度離心法分離腎移植術(shù)后病人及健康對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞。
　　 2用化學(xué)發(fā)光凝

5、膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)方法檢測(cè)腎移植術(shù)后病人外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性。
　　 3采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)腎移植術(shù)后病人外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)TNF-αmRNA的表達(dá)情況。
　　 4用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后，各組間用單因素方差分析(F檢驗(yàn))或者Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：

6、
　　 1腎移植術(shù)后穩(wěn)定組，感染組，排斥組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性分別為4.65±1.37、16.43±5.97、56.18±12.58，健康對(duì)照組單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性為2.70±0.58。穩(wěn)定組和感染組，穩(wěn)定組和排斥組，感染組和排斥組結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。健康對(duì)照組和術(shù)后穩(wěn)定組結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2腎移植術(shù)后穩(wěn)定組，感染組，排斥組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)TN

7、F-α的mRNA的表達(dá)量分別為0.445±0.12、0.546±0.11、0.622±0.10，健康對(duì)照組單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)TNF-α的mRNA的表達(dá)量為0.419±0.16。穩(wěn)定組和感染組，穩(wěn)定組和排斥組，結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。感染組和排斥組，健康對(duì)照組和術(shù)后穩(wěn)定組結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1腎臟移植術(shù)后發(fā)生排斥時(shí)，外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活性和TNF-α的mRNA的表