利用細胞炎癥模型研究牛蒡低聚果糖的抗炎作用及相關機制.pdf

1、炎癥是機體對各種致炎因素及其所產生損傷的防御反應，但過度的炎癥反應也會對機體造成損傷。目前臨床上常用的抗炎藥主要有兩類:非甾體抗炎藥和甾體類抗炎藥。雖然這兩類抗炎藥都有一定的臨床抗炎效果，但長期大量使用也會產生一系列不良反應，如胃粘膜、肝臟、腎臟損害等。天然藥物具有來源廣、造價低、副作用小等特點，隨著對天然藥物研究的不斷深入，部分天然藥物的抗炎作用已經得到認可。尋找低毒高效的新型天然抗炎藥物是當前的研究熱點之一。
　　 牛蒡(b

2、urdock)屬菊科牛蒡屬直根系，是兩年生大型草本植物，具有藥食同源的特點。牛蒡根含有多種生物活性物質，其藥理作用廣泛。其中牛蒡低聚果糖（burdock fructo-oligsaccharide，BFOS）是從牛蒡根中提取純化的寡糖。已發(fā)現BFOS具有抗腫瘤、抗疲勞以及增強自身免疫力等功能，但牛蒡低聚果糖的抗炎作用研究尚未見報道。
　　 本研究以牛蒡低聚果糖為研究對象，采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）

3、處理小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞建立炎癥模型，研究牛蒡低聚果糖的抗炎作用及作用機制，為開發(fā)新的天然抗炎藥物提供理論基礎和實驗證據。
　　 [研究背景]
　　 炎癥是機體對有害刺激因素的防御性反應，是損傷與抗損傷并存的病理過程，其中巨噬細胞在炎癥反應中發(fā)揮重要作用。LPS是十分重要的致炎因子，它能夠刺激體內的巨噬細胞合成和釋放多種內源性活性因子，進而誘發(fā)炎癥。利用LPS處理巨噬細胞是常用的體外炎癥模型造模手段。天然藥

4、物具有低毒、高效及來源廣泛的特點，其抗炎作用已經受到越來越多的關注。
　　 牛蒡是一種典型的藥食同源植物，藥理作用廣泛，其毒副作用尚未見報道。牛蒡低聚果糖是從牛蒡根中分離的寡糖，屬于功能性食用多糖。迄今為止對BFOS的抗炎作用未見報道，本課題對BFOS的抗炎作用及可能機制進行了初步研究。
　　 [研究目的]
　　 采用LPS處理小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞建立細胞炎癥模型，研究牛蒡低聚果糖BFOS的抗炎作用

5、及相關機制。
　　 [研究方法]
　　 用LPS處理小鼠巨噬系RAW264.7細胞，建立炎癥模型，用不同濃度BFOS處理，觀察各項炎癥相關指標:采用Real-time PCR方法檢測細胞因子及炎性介質IL-6、MCP-1、TNF-α、COX-2和iNOS的mRNA表達水平;ELISA對IL-6和MCP-1分泌情況進行檢測;Westem blotting檢測iNOS和COX-2蛋白表達情況;初步明確BFOS的抗炎作用后，對

6、可能涉及的信號通路中關鍵分子進行檢測，進而探明其抗炎機制。
　　 [研究結果]
　　 1.Real-time PCR和ELISA的結果表明LPS可顯著上調RAW264.7細胞中IL-6、MCP-1和TNF-α mRNA水平的表達及IL-6、MCP-1的分泌，200、400、600μmol/LBFOS均可抑制IL-6、MCP-1和TNF-α的mRNA表達水平及IL-6、MCP-1的分泌;
　　 2.Real-tim

7、e PCR和Western blotting結果表明LPS可上調RAW264.7細胞中iNOS和COX-2的表達，200、400、600μmol/L BFOS對iNOS和COX-2的表達均有抑制作用;
　　 3.Western blotting結果表明LPS可顯著上調RAW264.7細胞中NF-κBp65及IκB磷酸化水平，200、400、600μmol/L BFOS均可抑制LPS上調的NF-κBp65和IκB磷酸化水平;

8、>　　 4.Western blotting結果表明LPS可顯著上調RAW264.7細胞中Erk，P38及JNK磷酸化水平，BFOS處理則使三者磷酸化水平降低。
　　 [結論]
　　 在小鼠RAW264.7巨噬細胞中，BFOS均可顯著抑制LPS上調的IL-6、MCP-1和TNF-α轉錄水平和蛋白水平的表達，同時抑制COX-2及iNOS的表達，以上結果顯示BFOS具有抗炎作用。進一步研究發(fā)現BFOS能夠顯著抑制LPS誘導