桑椹中白藜蘆醇及其苷的含量和光穩(wěn)定性研究及MaPAL基因的克隆分析.pdf

1、桑椹是食藥兩用的水果，是中醫(yī)藥中的常用滋補藥材，具有生津止渴、滋陰補血、補肝益腎、固精安胎、烏須黑發(fā)、聰耳明目、安神養(yǎng)心、潤腸通便、健步履、利關節(jié)、祛風濕、解酒等功效，常用于治療糖尿病、肝腎陰虛、失眠耳鳴、津液不足、風濕、便秘、須發(fā)早白、神經(jīng)衰弱等癥狀。桑椹的藥用物質基礎之一是其中的白藜蘆醇及其苷。白藜蘆醇及其苷具有顯著的抗癌抑癌、保護心血管、抗氧化和抗自由基、保護神經(jīng)、抗炎、抗細菌和真菌、拮抗內皮素的作用，并顯示雌激素樣活性，影響骨代

2、謝。
　　 桑椹是富含白藜蘆醇的食物，但迄今對桑椹中的白藜蘆醇及其苷的研究尚少。為了確定桑椹的最佳采收期，篩選白藜蘆醇總含量更高的桑椹品種，為市場提供保健功能更佳的桑椹，本實驗研究了桑椹成熟過程中白藜蘆醇及其苷的含量變化，比較了不同品種桑椹中白藜蘆醇及其苷的含量，并研究了桑椹汁中白藜蘆醇及其苷的光穩(wěn)定性。
　　 本文以重慶西里蠶種廠所產桑椹為材料，建立了同時測定桑椹中白藜蘆醇及其苷含量的RP-HPLC方法，色譜柱為phe

3、nomenex C18柱(150 mm×4.6 mm，4μm)，以甲醇-水為流動相梯度洗脫，檢測波長305 nm，流速0.8 mL/min。對該方法進行了方法學評價，結果顯示：該方法測定桑椹中白藜蘆醇及其苷含量的專屬性強；分別在0.5～50μg/mL和2～100μg/mL進樣濃度范圍線性關系良好；儀器精密度和日內精密度均良好，RSD＜4％；準確度良好，加樣回收率95％～105％之間；重復性良好，RSD＜1.5％。采用該含量測定方法測定了

4、紅果2號成熟過程中白藜蘆醇及其苷的含量變化，并比較了紅果2號、紅果1號、西農1號、嘉陵30號1系、嘉陵30號2系等五個果桑品系的成熟桑椹的白藜蘆醇及其苷含量。結果顯示，在桑椹發(fā)育全程中白藜蘆醇苷的含量始終高于白藜蘆醇，它們在桑椹中的含量均為紅果中期最高，紫果時下降；五個桑椹品種中，西農1號紅果的總白藜蘆醇含量最高，達94.5μg/g。確定桑椹的最佳采摘期為紅果剛轉紫時。
　　 本文還考察了與桑椹汁或花色苷溶液混合的反式白藜蘆醇及

5、其苷對紫外光的穩(wěn)定性，以反式白藜蘆醇及其苷轉化為順式的百分率為穩(wěn)定性評價指標，發(fā)現(xiàn)在低濃度花色苷存在時，反式白藜蘆醇及其苷的異構轉化率更高，提示反式白藜蘆醇及其苷在紫外線下的反應活性較花色苷更高；而高濃度的花色苷可抑制紫外線引起的反式白藜蘆醇、反式白藜蘆醇苷的變構作用，其原因可能是高濃度的花色苷可吸收大部分紫外光，使實際到達白藜蘆醇及其苷分子的紫外光強度大大降低，從而保護反式白藜蘆醇及其苷，降低它們轉化為順式異構體的百分率。加入桑椹汁后

6、，反式白藜蘆醇及其苷在紫外光下的穩(wěn)定性增強，其原因也可能是桑椹汁中大量的花色苷對白藜蘆醇及其苷有保護作用。
　　 克隆了桑中苯丙氨酸氨基裂解酶的基因MaPAL的cDNA序列。該基因cDNA全長為含有一個2181 bp的開放閱讀框(ORF)，能夠編碼含有726個氨基酸殘基的蛋白；該蛋白分子量為78.49 kDa，預測等電點(pI)8.2，分子式是C3453H5530N956O1074S27；分布在葉綠體或類囊體中。本文還對MaPA