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文檔簡介
1、目的:探討人剪切修復基因XPD(XerodermapigmentosumD)轉染至人肝癌SMMC-7721細胞后,對腫瘤細胞增殖、遷移、凋亡以及PTEN基因表達的影響。
方法:本實驗使用脂質體LipofectamineTM2000作為載體介質,用瞬時轉染法將空載質粒pEGFP-N2和重組質粒pEGFP-N2-XPD轉染入人肝癌細胞株SMMC-7721細胞內(nèi)。實驗分為四個組:空白對照組、脂質體組、pEGFP-N2組、pEGFP-
2、N2-XPD組。通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達;蛋白印跡(Westernblotting)法檢測腫瘤細胞中XPD和PTEN蛋白的表達水平;MTT法檢測腫瘤細胞的增殖水平;Transwell實驗觀測腫瘤細胞遷移能力的改變;流式細胞儀檢測腫瘤細胞的凋亡水平。
結果:轉染空載質粒pEGFP-N2和重組質粒pEGFP-N2-XPD的人肝癌SMMC-7721細胞在熒光顯微鏡下均可見綠色熒光,表明轉染有效。pEGFP-N2-XPD組
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