蘇木抗癌有效成分分析及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的：從蘇木提取物中尋找抗癌有效成分，觀察其對(duì)膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，探討其誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡作用及機(jī)制。建立膀胱癌移植瘤模型，觀察其對(duì)荷瘤動(dòng)物的抗腫瘤作用。
　　 方法：采用不同溶劑從蘇木中提取出粗提物，液相色譜法測(cè)定各提取物中幾種主要組分的含量；以人膀胱癌T24細(xì)胞為靶細(xì)胞，采用錐蟲藍(lán)拒染法測(cè)定各提取物20、40、60、80、100min時(shí)對(duì)靶細(xì)胞的殺傷率；選擇與殺傷率具正相關(guān)性的主要組分，進(jìn)行反復(fù)色譜層析，分離得到純度達(dá)到9

2、2％以上的單體；采用核磁共振、質(zhì)譜、紅外等波譜學(xué)方法對(duì)該單體進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定。錐蟲藍(lán)拒染法觀察不同濃度的巴西木素不同時(shí)間對(duì)靶細(xì)胞的增殖抑制作用；均質(zhì)生物發(fā)光法檢測(cè)靶細(xì)胞內(nèi)Caspase-3,9的活性；流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)巴西木素對(duì)靶細(xì)胞的凋亡情況。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，以膀胱癌細(xì)胞株T24和BTT 制備腹腔和皮下移植瘤模型，兩種模型均隨機(jī)分為對(duì)照組、蘇木提取物（巴西木素含量>50％）組、絲裂霉素組。記錄小鼠出現(xiàn)腫瘤的時(shí)間，測(cè)量皮下腫瘤的

3、長(zhǎng)經(jīng)和短徑，計(jì)算腫瘤體積及抑瘤率；記錄腹腔移植瘤模型荷瘤動(dòng)物生存期，計(jì)算生命延長(zhǎng)率。
　　 結(jié)果：蘇木抗癌有效成分的分析：粗提物中R12與細(xì)胞殺傷率呈正相關(guān)性(r100min=0.941,P<0.001)，鑒定R12的主要成分是巴西木素。
　　 細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)：不同濃度巴西木素對(duì)靶細(xì)胞的增殖影響不同，巴西木素濃度為25μg/ml時(shí)，4h內(nèi)無(wú)明顯影響(P>0.05)；不同濃度(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml

4、、200μg/ml)巴西木素與靶細(xì)胞作用8h，細(xì)胞抑制率分別為43.19％、60.73％、86.38％、93.89％(P<0.05)，以及50μg/ml的巴西木素與靶細(xì)胞作用不同時(shí)間(4、8、24、48h)后，細(xì)胞抑制率分別為52.72％、60.73％、91.77％、96.41％(P<0.05)；巴西木素與靶細(xì)胞作用16h后，在7.5-60μg/ml 范圍內(nèi)細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度增加呈現(xiàn)0.15％、1.35％、2.91％、34.76％的

5、上升趨勢(shì)，生物發(fā)光檢測(cè)25μg/ml 巴西木素作用后靶細(xì)胞內(nèi)Caspase-3,9的活性略有升高，但與對(duì)照無(wú)明顯差異(P>0.05)；激光共聚焦顯微鏡下可見靶細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：蘇木提取物在400、300、200mg/Kg 劑量下對(duì)荷瘤裸鼠生命延長(zhǎng)率分別為58.42％、56.90％、51.50％(P<0.05)，對(duì)T739小鼠生命延長(zhǎng)率分別為11.80％、4.32％、10.77％(P>0.05)；T739小鼠皮下移植

6、瘤模型對(duì)照組平均腫瘤體積1.092±0.403cm3，蘇木提取物300mg/Kg 劑量組平均腫瘤體積0.656±0.117cm3，絲裂霉素組平均腫瘤體積0.238±0.853cm3，對(duì)照組的平均腫瘤體積與蘇木提取物組及絲裂霉素組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，蘇木提取物與絲裂霉素的抑瘤率分別為40.25％、69.78％。結(jié)論：巴西木素是蘇木中主要抗癌活性物質(zhì)之一。巴西木素對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡