慢性粒細胞白血病患者嗜堿性粒細胞的新探索.pdf

1、目的： 眾所周知，慢性粒細胞白血病患者骨髓及外周血中嗜堿性粒細胞的異常增多是其預(yù)后不良的指標。同時，干擾素α治療慢性粒細胞白血病有效的一個標志就是嗜堿性粒細胞數(shù)量的減少。近年來，隨著對漿細胞樣樹突狀細胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC)--干擾素專職產(chǎn)生細胞研究的深入，慢性粒細胞白血病患者體內(nèi)漿細胞樣樹突狀細胞的異常及其與慢性粒細胞白血病療效、預(yù)后的關(guān)系逐漸成為關(guān)注的焦點。有動物試驗研究發(fā)現(xiàn)，單純

2、從細胞形態(tài)學上所認定的嗜堿性粒細胞并不具有目前國際上所認定的嗜堿性粒細胞的分子表型。那么，慢性粒細胞白血病患者體內(nèi)異常增多的嗜堿性粒細胞是真正意義上的嗜堿性粒細胞嗎?它與體內(nèi)的漿細胞樣樹突狀細胞有何關(guān)系?這正是本課題研究的意義所在。 方法： 選擇經(jīng)血液學，骨髓象，染色體及分子學檢查，確診為慢性粒細胞白血病慢性期，干擾素α治療有效，干擾素α治療無效加速期或急變期的患者，分為三組，利用Ficoll密度梯度離心法分離三組患者骨

3、髓單個核細胞，再將所得細胞利用聚蔗糖一泛影葡胺法(polyglucosan-diatrizoate)進行形態(tài)學意義上的“嗜堿性粒細胞”的分離，涂片染色，倒置顯微鏡及光鏡觀察細胞形態(tài)，進行嗜堿性粒細胞計數(shù)的統(tǒng)計學檢驗；利用包被了FcεRI單克隆抗體的磁珠進行免疫磁珠分選，對細胞進行進一步的純化。之后，將所得細胞以漿細胞樣樹突狀細胞的表型進行流式細胞儀檢測，對比三組患者中所謂的“嗜堿性粒細胞”具有漿樣樹突狀細胞表型的比例，做統(tǒng)計學檢驗判斷其

4、顯著性。 結(jié)果： CML-MNC在經(jīng)過聚蔗糖-泛影葡胺法分離后，嗜堿性粒細胞純度達到90％以上，瑞氏-吉姆薩染色光鏡下可見直徑10-14μm的單個核細胞，其細胞核內(nèi)包含有濃縮的染色質(zhì)，這種細胞核，我們形象的稱之為“三葉草”或“奶油糕點”，胞核分葉不清楚，胞質(zhì)含形狀不規(guī)則、大小不等的嗜堿性顆粒。其中，急變期組或干擾素治療無效組“嗜堿性粒細胞”計數(shù)明顯較慢性期組與干擾素治療有效組明顯增加。流式細胞儀檢測細胞表面標志，在這種形

5、態(tài)學認定的“嗜堿性粒細胞”中發(fā)現(xiàn)具有一定數(shù)量的表達pDC表面標志的細胞，而該種標志又與國際公認的嗜堿性粒細胞的標志有著明顯的區(qū)別。隨著疾病進展，該種表達pDC表面標志的細胞含量明顯減少。不同的疾病進展期，所占數(shù)量不同，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論：1.慢性粒細胞白血病患者體內(nèi)分離出的形態(tài)學認定的“嗜堿性粒細胞”，其含量百分比隨著疾病的進展而增加，隨療效的提高而減少。 2.慢性粒細胞白血病患者體內(nèi)分離出的形態(tài)學