伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細(xì)胞白血病的作用及機(jī)制.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細(xì)胞白血病的作用及機(jī)制姓名：楊東光申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：張日20070401伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞模型的建立及亞砷酸對抗慢性粒細(xì)胞白血病的作用及機(jī)制中文摘要結(jié)果：建立了伊馬替尼耐藥患者A B L K D 點(diǎn)突變的檢測方法。I M 耐藥的C M L患者A B L K D 總的點(diǎn)突變檢出率為4 5 ．4 5 ％。其中，血液學(xué)耐

2、藥患者A B L K D 點(diǎn)突變檢出率為5 7 ．1 4 ％。遺傳學(xué)耐藥患者A B L K D 點(diǎn)突變檢出率為2 5 ％。共發(fā)現(xiàn)3 種點(diǎn)突變，G 2 5 0 E ( 2 例) 、E 2 5 5 K ( 1 例) 和T 3 1 5 I ( 2 例) 。血液學(xué)耐藥的患者，發(fā)現(xiàn)突變的時(shí)間最早為I M 治療后4 個(gè)月，最長為I M 治療后9 個(gè)月。遺傳學(xué)耐藥患者突變檢出時(shí)間是I M 治療后1 2 個(gè)月。所有患者I M 治療前均未檢出突變。結(jié)論：

3、發(fā)生I M 耐藥的C M L 患者，其B c r - A b l 融合基因A B L K D 存在著高頻率的點(diǎn)突變，且與I M 治療相關(guān)。通過對耐藥點(diǎn)突變情況進(jìn)行早期檢測，有利于在發(fā)生耐藥前進(jìn)行治療干預(yù)，為患者提供更有效的治療選擇。三、伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞模型的建立目的：建立I M 耐藥的C M L 細(xì)胞模型。方法：將分別含有全長B c r - A b l 融合基因發(fā)生I M 耐藥的T 3 1 5 I 及E 2 5 5 K

4、 點(diǎn)突變的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體M I G R l p 2 1 0 ／T 3 1 5 1 及M I G R l p 2 1 0 ／E 2 5 5 K 經(jīng)亞克隆、純化、P C R 鑒定后，采用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分別轉(zhuǎn)染到到依賴細(xì)胞因子生長的髓系原始細(xì)胞3 2 D 細(xì)胞中，篩選出表達(dá)B c r - A b l 的細(xì)胞，然后用熒光顯微鏡及蛋白免疫印記等方法鑒定陽性克隆，并分離單個(gè)克隆。經(jīng)實(shí)時(shí)定量P C R ( r e a l t i m e

5、q u a n t i t a t i v eP C R ， R Q ．P C R ) 檢測各細(xì)胞株B c r - A b l 融合基因拷貝數(shù)。結(jié)果：成功建立了I M 耐藥的C M L 細(xì)胞模型3 2 D p 2 1 0 T 3 1 5 1 及3 2 D p 2 1 0 E 2 5 5 K ，兩細(xì)胞株B c r - A b l 融合基因拷貝數(shù)均較高，并表達(dá)B c r - A b l 融合蛋白。結(jié)論：建立了I M 耐藥的C M L 細(xì)胞模

6、型，為研究I M 耐藥的C M L 提供了新的有力工具。四、亞砷酸對伊馬替尼耐藥的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞模型的作用及機(jī)制目的：探討A T O 與I M 是否存在交叉耐藥現(xiàn)象以及A T O 對B e r - A b l 陽性細(xì)胞的作用是否存在靶向性，探討A T O 與I M 對I M 耐藥細(xì)胞株聯(lián)合應(yīng)用的性質(zhì)，探討A T O 對I M 耐藥的C M L 細(xì)胞株的作用及其作用機(jī)制。方法：采用四氮唑藍(lán)( m e t h y l ．t h i a

7、 z 0 1 ．t e t r a z o l i u m ，M T T ) 法測定I M 、A T O 單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用于3 2 D ／M I G 、3 2 D ／p 2 1 0 、3 2 D ／p 2 1 0 T 3 1 5 1 及3 2 D ／p 2 1 0 E 2 5 5 K 的I C 5 0 。測定伊馬替尼、亞砷酸單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用- 于3 2 D ／p 2 1 0 , Z f l t ．3 2 D ／p 2 1 0 E 2 5 5