卷煙煙氣凝集物誘發(fā)永生化人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的實驗研究.pdf

1、目的：檢測卷煙煙氣凝集物(cigarette smoking condensates，CSC)，對體外培養(yǎng)的永生化人支氣管上皮細(xì)胞(immortalized human bronchial epithelial cells，BEP2D)的惡性轉(zhuǎn)化能力，欲建立單因素吸煙致肺癌的細(xì)胞模型，并檢測不同轉(zhuǎn)化時期差異表達(dá)的基因，為深入研究吸煙致肺癌發(fā)生多階段過程中的細(xì)胞和分子機理提供實驗依據(jù)。 方法：首先用四唑鹽(MTT)比色實驗，檢測C

2、SC對BEP2D慢性毒性效應(yīng)，依據(jù)細(xì)胞相對存活率，篩選慢性轉(zhuǎn)化劑量，從細(xì)胞生長動力學(xué)、形態(tài)學(xué)、血清抗性、錨著獨立性及裸鼠成瘤等方面對其轉(zhuǎn)化特性進(jìn)行鑒定，再利用人類全基因組寡核苷酸芯片，篩選對照及不同染毒代齡細(xì)胞間差異表達(dá)基因。同時，利用二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)和氫化乙錠(HE)活性氧標(biāo)記技術(shù)，初步探測了CSC對BEP2D及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的氧化損傷作用。 結(jié)果：CSC對BEP2D以細(xì)胞毒性致死效應(yīng)為主，隨著CSC劑量增加，細(xì)

3、胞存活比率下降，據(jù)此，我們選定細(xì)胞相對存活率在60％-80％下0.001支煙/ml(LHC-8)為轉(zhuǎn)化劑量，其對應(yīng)的酒精濃度0.0005 ml/ml(酒精/LHC-8)作為溶劑對照，取CSC處理后P10代、P20代、P30代、P40代細(xì)胞，對其轉(zhuǎn)化特性進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)第P30代和P40代細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的生長速度加快，倍增時間縮短，對血清抗性及錨著獨立性增加。差異表達(dá)基因比較結(jié)果顯示，大多數(shù)差異表達(dá)基因為下調(diào)，極少數(shù)基因為上調(diào)，其中位于啟動