上調(diào)Sp1表達對小細胞肺癌細胞耐藥逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文上調(diào)Sp1表達對小細胞肺癌細胞耐藥逆轉(zhuǎn)作用姓名：王彥玲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：閻蘊力20060301中文摘要件，而無常見的TATA盒。研究表明，spl是TopoII的啟動區(qū)活性的激活劑。它是一個普遍存在于哺乳動物細胞中的轉(zhuǎn)錄因子，在保證持家基因、組織特異性表達基因和病毒基因正確表達過程中起重要作用。Spl特異性地結(jié)合啟動子區(qū)的Gc／GT盒，激活相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。本研究通過轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子s

2、pl表達型質(zhì)粒，增強spl的表達水平，探討轉(zhuǎn)錄因子Spl對人小細胞肺癌耐藥細胞H446廠vP的作用機制。方法：1細胞培養(yǎng)：將H446／VP細胞(人sCLC細胞系，對足葉乙甙耐藥)用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，內(nèi)含10％新生牛向清、青霉素100u／lnl、鏈霉素100肛g／lnl，置37℃，飽和濕度，5％cO：環(huán)境下培養(yǎng)，待細胞進入對數(shù)生長期后進行實驗操作。2spl質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：Spl質(zhì)粒為表達型質(zhì)粒，由德國suske教授惠贈。1)采用LB液

3、體培養(yǎng)基培養(yǎng)DH50【大腸桿菌，以低滲氯化鈣法制作感受態(tài)大腸桿菌，加入spl表達型質(zhì)粒，混勻后冰浴30min。42口c熱休克90s，加入無抗生素的LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)搖菌45min，鋪到含100p∥ml的卡那霉素的固體LB平板培養(yǎng)基中，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中放置30min后倒置培養(yǎng)。24小時后挑取生長良好的克隆加到含有100LLg／ml卡那霉素的100m1液體LB培養(yǎng)基中置37℃恒溫水浴搖床100rpm培養(yǎng)過夜。2)堿裂法小量抽提質(zhì)粒：取培