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1、目的:動(dòng)態(tài)觀察亞低溫治療新生HIE大鼠腦神經(jīng)元凋亡及神經(jīng)元內(nèi)BDNF表達(dá)情況,并通過水迷宮實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠記憶功能,探討亞低溫對(duì)HIE大鼠治療的神經(jīng)保護(hù)作用及遠(yuǎn)期療效。 方法:采用Rice法建立新生SD大鼠HIE模型,并于6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行亞低溫(31℃)治療48小時(shí),HIBD對(duì)照組為建模后37℃下觀察48小時(shí)。干預(yù)后24小時(shí)、7天及28天,采用TUNEL染色分別對(duì)比觀察不同組間大鼠海馬神經(jīng)元凋亡情況,免疫組化后用光密度分析法分別對(duì)比觀察
2、不同組間大鼠海馬BDNF表達(dá)情況,并于干預(yù)后28天行水迷宮試驗(yàn),通過逃避潛伏期試驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)了解各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。 結(jié)果: (1)HIE模型觀察:建立模型后24h,HIE組大鼠活動(dòng)明顯少于假手術(shù)組,14d后該組有明顯的腦缺血側(cè)眼瞼下垂;對(duì)腦標(biāo)本進(jìn)行HE染色光鏡下觀察發(fā)現(xiàn),腦水腫明顯,海馬神經(jīng)元排列紊亂,可見片狀死亡細(xì)胞,而假手術(shù)組腦無明顯異常。 (2)TUNEL染色結(jié)果:亞低溫治療后24小時(shí)及7天,亞低
3、溫治療組海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)目分別為28.4±4.21和22.8±1.92,HIBD對(duì)照組分別為52.4±6.20和37.6±6.58,假手術(shù)組分別為2.01±2.30和1.62±4.51,亞低溫治療組海馬神經(jīng)元凋亡明顯低于HIE對(duì)照組(p<0.05);干預(yù)后28天,上述各組間,海馬神經(jīng)元凋亡無明顯差異(p>0.05)。 (3)免疫組化結(jié)果:以光密度方法分析BDNF在海馬的表達(dá)情況,亞低溫治療后24小時(shí)及7天,亞低溫治療組海馬神經(jīng)元
4、內(nèi)BDNF表達(dá)分別為11215.04±620.48和8736.08±495.04,HIBD對(duì)照組分別為3920.48±410.02和2952.32±245.01,假手術(shù)組分別為1312.77±176.00和1474.74±151.14,亞低溫組明顯高于對(duì)照組(p<0.05),而與假手術(shù)組相比較無明顯差異(p>0.05);干預(yù)后28天,上述各組間,神經(jīng)元內(nèi)BDNF表達(dá)均無明顯差異(p>0.05)。 (4)水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果:亞低溫治療
5、后各組大鼠飼養(yǎng)(相同條件下)28天,逃避潛伏期實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:亞低溫治療組6.858±3.33秒,HIE對(duì)照組51.779±11.77秒,假手術(shù)組4.321±2.35秒,表明亞低溫治療組所需時(shí)間明顯短于對(duì)照組(p<0.05),與假手術(shù)組相比較無明顯差異(p>0.05);空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:亞低溫治療組59.33±10.81%,HIBD對(duì)照組9.03±5.36%,假手術(shù)組68.18±8.17%,表明亞低溫治療組在平臺(tái)區(qū)間航行百分比明顯高于對(duì)照
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