shRNA介導(dǎo)IGF-IR基因沉默誘導(dǎo)人肺癌A549細(xì)胞凋亡的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的:評價RNA干擾(RNA mteffernce,RNAi)技術(shù)對人肺癌A549細(xì)胞系中胰島素樣生長因子I類受體(IGF-IR)表達(dá)的阻斷效應(yīng),以及IGF-IR基因沉默后細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和腫瘤體內(nèi)外生物學(xué)特性的改變. 方法:應(yīng)用U6啟動子介導(dǎo)DNA模板轉(zhuǎn)錄生成短發(fā)夾樣RNA(shRNA)并轉(zhuǎn)染人肺癌A549細(xì)胞株,經(jīng)RT-PCR和Western blot檢測IGF-IR表達(dá)的改變;Western blot檢測bCl-2和ca

2、spase-3的表達(dá);進(jìn)一步分析IGF-IR信號通路中Erk和Akt磷酸化程度;MTT法檢測體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長抑制率;流式細(xì)胞技術(shù)和DNA ladder法檢測細(xì)胞增殖周期和凋亡易感性變化;荷瘤裸鼠肺癌模型中觀察瘤內(nèi)注射的抑瘤效應(yīng)及 TUNEL 法檢測瘤內(nèi)細(xì)胞凋亡情況. 結(jié)果:IGF-IR表達(dá)水平明顯下降(抑制率高達(dá)89.8﹪),并同步伴隨bcl-2表達(dá)減少、ERK和Akt磷酸化受抑、caspaSe-3激活增加;細(xì)胞滯留于GO期

3、的比例上升,對酒精誘導(dǎo)的凋亡易感性明顯增加;腫瘤細(xì)胞活力明顯下降:直接瘤內(nèi)注射能有效抑制腫瘤生長(腫瘤體積減少50﹪～60﹪)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡. 結(jié)論:運用RNAi技術(shù)能有效抑制A549細(xì)胞IGF-IR的表達(dá),使細(xì)胞增殖能力減弱,凋亡易感性增加,瘤體生長受抑,抑制IGF-IR產(chǎn)生的抗腫瘤作用可能與其下游通路中有絲分裂原轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(ERK)和抗細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)途徑(蛋白激酶B途徑)HI3Ak/AKt-1的活化受抑有關(guān).shRNA介