脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)中的研究.pdf

1、目的：采用酶消化法進(jìn)行大鼠脂肪來(lái)源干細(xì)胞的體外培養(yǎng)，并鑒定獲得的干細(xì)胞，研究脂肪來(lái)源干細(xì)胞的獲取途徑及培養(yǎng)方法并為其體外增殖培養(yǎng)提供參考依據(jù)。
　　方法：取4～6周SD大鼠腹股溝處脂肪組織，置于D-Hank's液沖洗凈后剪成8mm3左右組織塊。將組織塊置于0.1％Ⅰ型膠原酶消化組織塊30min，用70μm孔徑的篩網(wǎng)過(guò)濾獲得消化液體，未消化完全的組織塊繼續(xù)置于0.1％Ⅰ型膠原酶消化30min。將獲得的消化液在1500rpm中離心7分

2、鐘，棄上清，用含有10％FBS的DMEM中培養(yǎng)，24小時(shí)后換液以除去未貼壁的細(xì)胞。采用CCK-8繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞儀檢測(cè)脂肪干細(xì)胞表面標(biāo)志物。
　　結(jié)果：培養(yǎng)的細(xì)胞均具有典型的干細(xì)胞形態(tài)特征，增殖速度較快，培養(yǎng)第3天即可傳代，并且保持較高的增殖速度。脂肪干細(xì)胞標(biāo)志物CD29、CD44、CD54、CD105呈陽(yáng)性表達(dá)，造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD34、CD45陰性表達(dá)。
　　結(jié)論：利用酶消化法可以迅速獲取脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞，