全氟化碳汽化吸入對(duì)海水淹溺型呼吸窘迫綜合癥動(dòng)物治療作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)制作海水淹溺型呼吸窘迫綜合癥(seawaterrespireatory distress syndrome，SW-RDS)動(dòng)物模型，觀察PFC汽化吸入對(duì)SW-RDS的治療作用，同時(shí)從肺組織結(jié)構(gòu)變化、肺泡表面張力、磷脂組分、表面蛋白SP-B，SP-C mRNA的表達(dá)和SP-B蛋白定量分析等層面探討PFC汽化吸入治療SW-RDS的作用機(jī)制． 方法： 健康雌性新西蘭兔43只(平均體重3.00±0.18kg)，隨機(jī)分為

2、5組實(shí)驗(yàn)組，每組8只及空白組3只：①常規(guī)通氣組(CMV組)：Vt=8ml/kg，PEEP=0cmH2O，PFC=0ml/kg.h；②PFC汽化吸入組(PFC組)：Vt=8ml/kg，PEEP=0cmH2O，PFC=7ml/kg.h；③呼氣末正壓組(PEEP組)： Vt=8ml/kg，PEEP=8cmH2O，PFC=0ml/kg.h；④PFC汽化吸入+呼氣末正壓組(PEEP+PFC組)：Vt=8ml/kg，PEEP=8cmH2O，PFC=

3、7ml/kg.h；⑤對(duì)照組(C組)：模型制作成功后，撤離呼吸機(jī)，記錄自然死亡時(shí)間。前4組動(dòng)物按照不同的實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行相應(yīng)的通氣治療2小時(shí)，后調(diào)整為基礎(chǔ)參數(shù)繼續(xù)觀察4小時(shí)后處死。每組取6只動(dòng)物游離并結(jié)扎右肺，左肺進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，右肺進(jìn)行肺組織病理觀察及分子生物學(xué)指標(biāo)檢測(cè)．空白組3只直接處死，取右肺組織甲醛固定，觀察正常肺組織結(jié)構(gòu)。 第一部分：觀察SW-RDS兔在不同機(jī)械通氣模式治療2小時(shí)和后續(xù)4小時(shí)期間呼吸力學(xué)指標(biāo)、血液動(dòng)力學(xué)指

4、標(biāo)、氣體交換指標(biāo)的變化；觀察光學(xué)顯微鏡下肺泡、肺泡間質(zhì)的變化以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況；觀察透射電鏡下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞以及細(xì)胞胞漿內(nèi)板層體和線(xiàn)粒體的改變。 第二部分：從表面活性物質(zhì)方面探討PFC汽化吸入治療SW-RDS的作用機(jī)制。1、測(cè)定支氣管肺泡灌洗液肺泡表面張力變化，進(jìn)行表面活性物質(zhì)功能的評(píng)價(jià)：2、應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)從基因水平觀察表面活性蛋白SP-B和SP-C mRNA的表達(dá)；3、應(yīng)用免疫組化和Western blot技術(shù)

5、觀察SP-B在蛋白水平上的變化；4、應(yīng)用高效液相方法測(cè)定肺組織磷脂組分的變化。 結(jié)果： 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立SW-RDS模型成功后呼吸力學(xué)指標(biāo)(氣道峰壓、平臺(tái)壓、肺靜態(tài)順應(yīng)性)明顯惡化，氧合指數(shù)下降，應(yīng)用CMV治療上述指標(biāo)無(wú)改善，肺組織損傷明顯，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)板層體出現(xiàn)空泡化和排空現(xiàn)象，應(yīng)用PEEP、PFC和PFC+PEEP治療后，氣體交換和呼吸力學(xué)指標(biāo)均明顯改善，肺組織損傷減輕，肺泡不同程度復(fù)張，板層體空泡化程度減輕

6、。三組與CMV組比較呼吸力學(xué)指標(biāo)與氧合指數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，PFC汽化吸入對(duì)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)(平均動(dòng)脈壓和心率)未產(chǎn)生不良影響。在停止PFC汽化后，氧合改善作用仍能維持一段時(shí)間。PFC汽化吸入與PEEP在聯(lián)合治療期間具有一定的疊加作用，但PEEP并不利于這種協(xié)同作用的維持。在停止治療后，PFC+PEEP組氧合指數(shù)和肺順應(yīng)性在1小時(shí)內(nèi)降到單純PFC汽化吸入水平。C組動(dòng)物在脫機(jī)15分鐘內(nèi)全部死亡． 2. SW-RDS動(dòng)物支氣管

7、肺泡灌洗液(bronchus alveolarlavage fluids，BALF)表面張力明顯升高，應(yīng)用PFC和PFC+PEEP治療后，表面張力顯著下降，二組與CMV組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PEEP組表面張力雖有下降趨勢(shì)但與CMV組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3. PFC組、PEEP組和PFC+PEEP組SP-B、SP-C mRNA水平較CMV組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中PFC+PEEP組升高最明顯，與PEEP組基因表達(dá)水平比

8、較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異．免疫組化和蛋白免疫印跡證實(shí)PFC組和PFC+PEEP組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)SP-B表達(dá)較CMV組明顯增強(qiáng)。 4. 將表面張力和氧合指數(shù)與肺組織磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、SP-B mRNA、SP-C mRNA、SP-B蛋白含量進(jìn)行相關(guān)分析后發(fā)現(xiàn)：表面張力與SP-B mRNA、SP-C mRNA表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)，氧合指數(shù)與磷脂酰膽堿、SP-B mRNA、SP-C mRNA呈明顯正相關(guān)。提示表面活性蛋白與磷脂酰膽堿

9、對(duì)表面活性物質(zhì)功能和氣體交換有重要的影響。 結(jié)論： 1、PFC汽化吸入能明顯改善SW-RDS動(dòng)物的氣體交換和呼吸力學(xué)指標(biāo)，降低支氣管肺泡灌洗液表面張力，促進(jìn)肺泡復(fù)張，減輕肺組織損傷，減少肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)板層體表面活性物質(zhì)的分泌。同時(shí)PFC汽化吸入和PEEP聯(lián)合治療在改善氣體交換方面具有一定的協(xié)同效應(yīng)． 2、PFC汽化吸入對(duì)SW-RDS動(dòng)物氣體交換和呼吸力學(xué)改善作用以及后續(xù)效應(yīng)可能與PFC汽化吸入促進(jìn)了內(nèi)源性表面