全氟化碳汽化吸入對海水淹溺型呼吸窘迫綜合癥動物治療作用及機制的實驗研究.pdf

1、目的：通過制作海水淹溺型呼吸窘迫綜合癥(seawaterrespireatory distress syndrome，SW-RDS)動物模型，觀察PFC汽化吸入對SW-RDS的治療作用，同時從肺組織結構變化、肺泡表面張力、磷脂組分、表面蛋白SP-B，SP-C mRNA的表達和SP-B蛋白定量分析等層面探討PFC汽化吸入治療SW-RDS的作用機制． 方法： 健康雌性新西蘭兔43只(平均體重3.00±0.18kg)，隨機分為

2、5組實驗組，每組8只及空白組3只：①常規(guī)通氣組(CMV組)：Vt=8ml/kg，PEEP=0cmH2O，PFC=0ml/kg.h；②PFC汽化吸入組(PFC組)：Vt=8ml/kg，PEEP=0cmH2O，PFC=7ml/kg.h；③呼氣末正壓組(PEEP組)： Vt=8ml/kg，PEEP=8cmH2O，PFC=0ml/kg.h；④PFC汽化吸入+呼氣末正壓組(PEEP+PFC組)：Vt=8ml/kg，PEEP=8cmH2O，PFC=

3、7ml/kg.h；⑤對照組(C組)：模型制作成功后，撤離呼吸機，記錄自然死亡時間。前4組動物按照不同的實驗分組進行相應的通氣治療2小時，后調整為基礎參數(shù)繼續(xù)觀察4小時后處死。每組取6只動物游離并結扎右肺，左肺進行支氣管肺泡灌洗，右肺進行肺組織病理觀察及分子生物學指標檢測．空白組3只直接處死，取右肺組織甲醛固定，觀察正常肺組織結構。 第一部分：觀察SW-RDS兔在不同機械通氣模式治療2小時和后續(xù)4小時期間呼吸力學指標、血液動力學指

4、標、氣體交換指標的變化；觀察光學顯微鏡下肺泡、肺泡間質的變化以及炎性細胞浸潤情況；觀察透射電鏡下肺泡Ⅱ型上皮細胞以及細胞胞漿內板層體和線粒體的改變。 第二部分：從表面活性物質方面探討PFC汽化吸入治療SW-RDS的作用機制。1、測定支氣管肺泡灌洗液肺泡表面張力變化，進行表面活性物質功能的評價：2、應用實時熒光定量PCR技術從基因水平觀察表面活性蛋白SP-B和SP-C mRNA的表達；3、應用免疫組化和Western blot技術

5、觀察SP-B在蛋白水平上的變化；4、應用高效液相方法測定肺組織磷脂組分的變化。 結果： 1. 實驗動物建立SW-RDS模型成功后呼吸力學指標(氣道峰壓、平臺壓、肺靜態(tài)順應性)明顯惡化，氧合指數(shù)下降，應用CMV治療上述指標無改善，肺組織損傷明顯，肺泡Ⅱ型上皮細胞內板層體出現(xiàn)空泡化和排空現(xiàn)象，應用PEEP、PFC和PFC+PEEP治療后，氣體交換和呼吸力學指標均明顯改善，肺組織損傷減輕，肺泡不同程度復張，板層體空泡化程度減輕

6、。三組與CMV組比較呼吸力學指標與氧合指數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義。此外，PFC汽化吸入對血流動力學指標(平均動脈壓和心率)未產(chǎn)生不良影響。在停止PFC汽化后，氧合改善作用仍能維持一段時間。PFC汽化吸入與PEEP在聯(lián)合治療期間具有一定的疊加作用，但PEEP并不利于這種協(xié)同作用的維持。在停止治療后，PFC+PEEP組氧合指數(shù)和肺順應性在1小時內降到單純PFC汽化吸入水平。C組動物在脫機15分鐘內全部死亡． 2. SW-RDS動物支氣管

7、肺泡灌洗液(bronchus alveolarlavage fluids，BALF)表面張力明顯升高，應用PFC和PFC+PEEP治療后，表面張力顯著下降，二組與CMV組比較，差異均有統(tǒng)計學意義。PEEP組表面張力雖有下降趨勢但與CMV組比較無統(tǒng)計學差異。 3. PFC組、PEEP組和PFC+PEEP組SP-B、SP-C mRNA水平較CMV組升高，差異均有統(tǒng)計學意義。其中PFC+PEEP組升高最明顯，與PEEP組基因表達水平比

8、較也有統(tǒng)計學差異．免疫組化和蛋白免疫印跡證實PFC組和PFC+PEEP組肺泡Ⅱ型上皮細胞內SP-B表達較CMV組明顯增強。 4. 將表面張力和氧合指數(shù)與肺組織磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、SP-B mRNA、SP-C mRNA、SP-B蛋白含量進行相關分析后發(fā)現(xiàn)：表面張力與SP-B mRNA、SP-C mRNA表達水平呈明顯負相關，氧合指數(shù)與磷脂酰膽堿、SP-B mRNA、SP-C mRNA呈明顯正相關。提示表面活性蛋白與磷脂酰膽堿

9、對表面活性物質功能和氣體交換有重要的影響。 結論： 1、PFC汽化吸入能明顯改善SW-RDS動物的氣體交換和呼吸力學指標，降低支氣管肺泡灌洗液表面張力，促進肺泡復張，減輕肺組織損傷，減少肺泡Ⅱ型上皮細胞內板層體表面活性物質的分泌。同時PFC汽化吸入和PEEP聯(lián)合治療在改善氣體交換方面具有一定的協(xié)同效應． 2、PFC汽化吸入對SW-RDS動物氣體交換和呼吸力學改善作用以及后續(xù)效應可能與PFC汽化吸入促進了內源性表面