葉酸代謝酶基因-環(huán)境交互作用與胃癌易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、本研究旨在通過(guò)宏觀流行病學(xué)、血清流行病學(xué)和分子流行病學(xué)相結(jié)合的手段，采用病例對(duì)照研究方法，對(duì)血漿tHcy水平以及葉酸代謝基因的功能性SNPs和標(biāo)簽SNPs單獨(dú)或聯(lián)合與胃癌遺傳易感性的關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果對(duì)于進(jìn)一步闡明胃癌的發(fā)病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)與我國(guó)人群胃癌遺傳易感性相關(guān)的危險(xiǎn)基因型，并將其作為分子標(biāo)志物用于篩選高危人群或易感個(gè)體從而為實(shí)施目標(biāo)明確的個(gè)體預(yù)防等方面具有重要的理論和實(shí)踐意義。 第一部分 血漿同型半胱氨酸水平與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的病

2、例對(duì)照研究 采用以人群為基礎(chǔ)的病例對(duì)照研究，使用熒光定量法檢測(cè)391名胃癌病例和608例正常對(duì)照人群的血漿同型半胱氨酸(tHcy)水平：運(yùn)用Logistic回歸模型分析血漿tHcy水平與胃癌的關(guān)系，同時(shí)探討吸煙、飲酒和H. pylori感染與血漿tHcy水平在胃癌發(fā)生過(guò)程中的交互作用。 研究結(jié)果表明，體內(nèi)高水平的tHcy能顯著增加個(gè)體患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)，特別是增加吸煙和飲酒者胃癌的發(fā)病危險(xiǎn)性，但吸煙、飲酒和H. pylori感

3、染與tHcy水平在胃癌的發(fā)生中未發(fā)現(xiàn)顯著的交互作用。 第二部分葉酸還原載體RFC1基因多態(tài)性與胃癌遺傳易感性的病例對(duì)照研究 低葉酸攝入可增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。葉酸還原載體(RFC1，SLCl9A1)作為離子交換工具是葉酸代謝的重要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可以通過(guò)運(yùn)送葉酸至細(xì)胞內(nèi)而參與葉酸。同型半胱氨酸的代謝。RFC1基因中功能性多態(tài)性G80A可能會(huì)引起葉酸一同型半胱氨酸代謝障礙，并且可能與胃癌的易感性有關(guān)。同時(shí)我們利用人類基因組計(jì)劃提供

4、的多態(tài)性數(shù)據(jù)，獲得RFC1的兩個(gè)標(biāo)簽SNPs rs2838956和rs2297291，分析RFC1功能性SNP和標(biāo)簽SNPs單獨(dú)或聯(lián)合與胃癌遺傳易感性的關(guān)系。本病例對(duì)照研究共獲得完整基因型的胃癌病例553名和健康對(duì)照593名，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase ChainReaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)的方法檢測(cè)基因型，結(jié)果顯

5、示，RFCl功能性SNP rsl05 1266(G80A)的基因型分布在病例和對(duì)照組之間差異有顯著性(x<'2>=8.81l，P=0.012)，而RFC1標(biāo)簽SNPs rs2838956和rs2297291兩位點(diǎn)的三種基因型的頻率在病例和對(duì)照組間的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=4.801，P=0.09；x<'2>=2.407，P=0.300)。非條件Logistic回歸分析也表明與80GG基因型相比，80AA基因型可顯著增加胃癌的風(fēng)

6、險(xiǎn)(AA基因型的調(diào)整OR=1.39，95％CI=1.01-1.90)。對(duì)于TagSNP rs2838956 A>G和rs2297291 G>A的改變，與野生型純合子基因型(AA和GG)相比，變異型雜合子(AG和GA)和變異型純合子(GG和AA)均與胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著關(guān)聯(lián)。單倍型分析中，以對(duì)照組中頻率最高的單倍型AGG(46.0％)為參比組，AGA、AAG兩種單倍型組合與胃癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AGA： OR=1.76，95％

7、CI=1.25-2.46；AAG：OR=3.33，95％CI=1.19-9.32)。對(duì)性別、年齡、吸煙、飲酒、H．pylori感染和血漿tHcy水平等因素分層分析顯示，攜帶RFC1基因rs2838956 AG/GG變異基因型可顯著增加女性(調(diào)整OR=1.69，95％CI：1.04-2.74)和不吸煙者(調(diào)整OR=1.42，95％CI：1.02～1.98)罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)；而攜帶rsl051266GA/AA基因型同時(shí)伴有血漿tHcy水平>1

8、5.0gmol/L的個(gè)體罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加了1.27倍(調(diào)整OR=2.27，95％CI：1.03-5.01)。 研究結(jié)果表明，RFC1基因功能性SNPG80A可增加胃癌風(fēng)險(xiǎn)，而標(biāo)簽SNPs位點(diǎn)(rs2838956A→G和rs2297291G→A)多態(tài)性改變未見(jiàn)與江蘇地區(qū)人群胃癌的發(fā)生存在顯著關(guān)聯(lián)。 第三部分 亞甲基四氫葉酸脫氫酶基因MTHFD多態(tài)性與胃癌易感性關(guān)系的研究 MTttFD是葉酸代謝通路中一種重要的

9、酶，其關(guān)鍵位置上殘基的突變可影響其脫氫酶活性。MTHFD基因G1958A和T401多態(tài)性改變可引起氨基酸改變而直接導(dǎo)致功能學(xué)上的改變，并且前者可引起血漿葉酸和同型半胱氨酸水平的改變。MTHFR與MTHFD是互為逆過(guò)程的代謝酶，研究表明MTHFRC677T多態(tài)性改變可導(dǎo)致其編碼的代謝酶熱穩(wěn)定性降低，從而影響葉酸一同型半胱氨酸代謝，同時(shí)大量的研究表明MTHFRC677T多態(tài)性改變一致增加不同種族人群胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。因此我們?cè)谝酝鵐THFR基

10、因多態(tài)性研究的基礎(chǔ)上，擬探討M2THFD基因G1958A和T401C兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系，并分析兩位點(diǎn)間不同基因型以及與MTHFRC677T多態(tài)性的聯(lián)合-作用，以及年齡、性別、吸煙、飲酒和血漿同型半胱氨酸(tHcy)水平與基因多態(tài)性對(duì)胃癌患病風(fēng)險(xiǎn)的影響。 采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)，共有病例589例，正常對(duì)照635例。采用PCR-RFLP的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)各位點(diǎn)基因型，結(jié)果顯示，兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)未見(jiàn)明顯連鎖不平衡(D’=0.40

11、6，r<'2>=0.033)。在G1958A和T401C多態(tài)性改變中，分別與野生基因型1958GG和401TT相比，攜帶1958AA和401CC等位基因可增加胃癌的患病風(fēng)險(xiǎn)(1958AA：調(diào)整OR=1.93；95％CI=1.25-2.98；401CC：調(diào)整OR=1.74；95％CI=1.21-2.52)。同時(shí)我們比較了G1958A和T401C不同基因型和血漿tHcy表型之間的關(guān)系，病例組的血漿tHcy水平均高于對(duì)照組，但均未達(dá)到顯著性水

12、平，隨著變異等位基因的增加，血漿tHcy水平也有增加的趨勢(shì)，但未達(dá)到顯著性水平。分層分析結(jié)果表明，攜帶401TT/TC基因型的個(gè)體中，同時(shí)攜帶1958AA基因型是1958GG/GA基因型罹患胃癌風(fēng)險(xiǎn)的2.60倍(調(diào)整OR=2.60；95％CI=1.34-5.02)；使用MTHFR677CC野生基因型和677CT/TT突變基因型作為分層因素，分析顯示，同時(shí)攜帶MTHFR677CT/TT突變基因型和MTHFD1958AA以及401CC突變基

13、因型的個(gè)體發(fā)生胃癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(調(diào)整OR=2.20；95％CI=1.27-3.82；調(diào)整OR=1.48；95％CI=1.12-1.97)。根據(jù)患病部位分類，以1958GG/GA基因型為參照，攜帶1958AA基因型者賁門胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加了96％，(調(diào)整OR=1.96；95％CI=1.17-3.27)，而患非賁門胃癌的風(fēng)險(xiǎn)則顯著增加了84％(調(diào)整OR=1.84；95％CI=1.03-3.31)；以攜帶401TT／CT基因型為參照，攜帶401

14、CC基因型者患非貴門胃癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加了93％(調(diào)整OR=1.93；95％CI=1.39-2.69)。按照性別、年齡、吸煙、飲酒、H．pylor感染狀況和血漿tHcy水平等因素對(duì)MTHFD G1958A、T401C基因多態(tài)性與胃癌的關(guān)聯(lián)進(jìn)行分層分析。結(jié)果顯示：與1958GG/GA基因型相比，攜帶1958AA基因型罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)在男性、年齡≥60歲、吸煙、不飲酒和H. pylori感染陽(yáng)性的個(gè)體中更為顯著；同時(shí)，與攜帶401CT/TT基因

15、型的個(gè)體相比，攜帶401CC基因型罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)在男性、年齡<60歲、吸煙、不飲酒以及血漿tHcy>15.0μmol/L的個(gè)體中更為顯著。 研究結(jié)果表明，葉酸代謝酶基因MTHFD功能性多態(tài)性改變(G1958A和T401C)可增加胃癌的風(fēng)險(xiǎn)，并與另一關(guān)鍵MTHFRC677T多態(tài)性在胃癌的發(fā)生上可能存在協(xié)同作用。胃癌病例和正常對(duì)照組攜帶MTHFD G1958A和T401C不同基因型個(gè)體血漿tHcy表型之間差異未達(dá)到顯著性水平，但分層