中藥當歸等誘導(dǎo)K562細胞凋亡及抗耐藥機制研究.pdf

1、目的： 課題研究中藥復(fù)方當歸注射液、馬錢子堿、士的寧誘導(dǎo)白血病細胞凋亡的作用，探討該類中藥抗白血病多藥耐藥的作用機制，為研究中藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑提供理論依據(jù)。 研究對象： 白血病K562/S、K562/A02細胞。 方法： 采用噻唑藍(MTT)法檢測依托泊苷(etoposide,VP16)的細胞毒作用。運用流式細胞術(shù)檢測中藥復(fù)方當歸注射液等非細胞毒性劑量單用及與VPl6聯(lián)用作用于白血病細胞K562/S和

2、K562/A02不同時間后凋亡率的變化。用Western-blot法檢測藥物作用不同時間、細胞凋亡前后bc1-2蛋白表達變化。 結(jié)果： 1、VP16對K562/S和K562/A02細胞增殖有一定影響，且呈濃度依賴性。為避免大劑量的誘導(dǎo)劑對細胞的殺傷作用而非誘導(dǎo)其凋亡，實驗選用IC<,50>前的濃度即1μg．ml<'-1>和40μg．ml<'-1>的VP16分別作用于K562/S和K562/A02細胞。 2、中藥復(fù)

3、方當歸注射液、馬錢子堿、士的寧在非細胞毒性劑量時，分別作用K562/A02細胞24、48、72小時，其凋亡率隨作用時間的延長有所增加，72小時復(fù)方當歸注射液組與陰性對照組比較有顯著差異(P<0.05)。三種中藥與VPl640μg．ml<'-1>聯(lián)用后，誘導(dǎo)細胞凋亡率明顯增加，且呈一定的時間依賴性。 3、復(fù)方當歸注射液、馬錢子堿、士的寧在非細胞毒性劑量時，分別作用K562/A02細胞24、48、72小時，對bc1-2蛋白表達影響不

4、明顯，但與VP16 40μg．ml<'-1>聯(lián)用后，可使其表達呈不同程度的下降，其中以復(fù)方當歸注射液組最明顯，且呈時間依賴性。 4、三種中藥可促進VP16誘導(dǎo)白血病細胞凋亡，下調(diào)bcl-2蛋白表達，是其逆轉(zhuǎn)白血病細胞多藥耐藥作用機制之一。 結(jié)論： 1、中藥復(fù)方當歸注射液、馬錢子堿、士的寧可部分逆轉(zhuǎn)白血病細胞的多藥耐藥性。 2、復(fù)方當歸注射液、馬錢子堿、士的寧逆轉(zhuǎn)多藥耐藥機制與其通過下調(diào)抗凋亡蛋白bc1-2的表達，