辛伐他汀誘導K562細胞凋亡及其機制的研究.pdf

1、目的：觀察辛伐他汀對K562細胞凋亡的影響，探討辛伐他汀誘導K562細胞凋亡的分子機制。 方法： 10μmol/L，20μmol/L，30μmol/L不同濃度辛伐他汀作用K562細胞72h后：1.采用熒光顯微鏡觀察凋亡細胞的形態(tài)變化。2.應(yīng)用AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率。3.DNA Ladder實驗檢測細胞凋亡條帶。4.激光掃描共聚焦顯微鏡檢測細胞內(nèi) Ca2+濃度。5用線粒體分離試劑分離出胞漿蛋白

2、、微粒體蛋白、線粒體蛋白。6.RT-PCR檢測Bcl-2、Bax、Bak、IP3R、SERCA、GRP78、caspase-9，-7、-6、-3、GADD153、Calpain、MAGEA-3基因mRNA表達。7.Western blot檢測GRP78、Calpain、Caspase-3，-6，-7，-9，-12、GADD13、細胞色素C蛋白水平。 結(jié)果： 1.辛伐他汀能誘導K562細胞凋亡，其作用具有濃度依賴性。

3、 2.Annexin V-FITC/PI雙染法檢測結(jié)果顯示，10μmol/L，20μmol/L，30μmol/L辛伐他汀作用K562細胞72h能誘導其凋亡，細胞凋亡率分別為(12.41±0.32)％，(19.08±0.26)％和(23.41±0.36)％，與對照組(4.2±0.19)比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。3.辛伐他汀作用K562細胞后出現(xiàn)典型的凋亡細胞形態(tài)學改變，包括核固縮、核碎裂和凋亡小體形成等，同時DNA凝膠電

4、泳可見典型的DNA Ladder。4.辛伐他汀作用K562 細胞后細胞內(nèi)Ca2+濃度增加，熒光強度分別為(43±2.9)，(54±2.7)，(64±2.6)，與對照組(36±2.7)比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。5.RT-PCR檢測結(jié)果顯示：Bax、Bak、IP3R、SERCA、GRP78、caspase-9，-7、-6、-3、GADD153、Calpain基因表達均有不同程度上調(diào)，而Bc1-2、MAGE-3基因表達均有不同

5、程度下調(diào)。 6.Western blot檢測顯示：Calpain、Caspase-3，-6，-7，-9，-12剪切活化、GRP78、GADD153表達增強，caspase-12定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細胞色素C從線粒體釋放。 結(jié)論： 1.辛伐他汀能誘導K562細胞凋亡，其作用具有濃度依賴性。 2.辛伐他汀可能通過下調(diào)Bcl-2，上調(diào)Bax、Bak、IP3R、SERCA來控制內(nèi)質(zhì)網(wǎng) Ca2+滲透并誘導K562細胞凋亡。

6、 3.辛伐他汀可能通過上調(diào)GADD153，下調(diào)MAGE-3 mRNA表達誘導K562細胞凋亡。 4.辛伐他汀可能通過上調(diào)caspase-9，-7、-6、-3 mRNA表達并激活caspase-12蛋白進而活化caspase-9，-7，-6，-3蛋白誘導K562細胞凋亡。 5.GRP78mRNA及蛋白表達上調(diào)和caspase-12蛋白剪切活化表明，辛伐他汀可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑誘導K562細胞凋亡。 6.本研究較深入