RNA干擾survivin基因?qū)epG2細(xì)胞凋亡及化療的影響.pdf

1、目的：觀察RNA干擾技術(shù)抑制人肝癌HepG2細(xì)胞survivin基因表達(dá)后對(duì)其細(xì)胞增殖及對(duì)其化療敏感性的影響，探討RNA干擾survivin基因表達(dá)對(duì)于肝癌治療的可行性。
　　 方法：構(gòu)建針對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞survivin基因靶序列的shRNA真核表達(dá)載體pshRNA-survivin-387，應(yīng)用Lipofectamine2000脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，后分別行以下的研究：
　　 (1)將HepG2細(xì)胞接種于6

2、孔板中，分為5組：空白對(duì)照組（不加藥物）、陰性對(duì)照組(3.2ugpshRNA-survivin-NC/孔)、低濃度轉(zhuǎn)染組(0.8ugpshRNA-survivin-387/孔)、中濃度轉(zhuǎn)染組(1.6ugpshRNA-survivin-387/孔)、高濃度轉(zhuǎn)染組(3.2ugpshRNA-survivin-387/孔)，作用48h后收集細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡指數(shù)。
　　 (2)將HepG2細(xì)胞接種于96孔板中，分為三組：空

3、白對(duì)照組（不加藥物）、陰性對(duì)照組（0.2ugpshRNA-survivin-NC/孔）、實(shí)驗(yàn)組（0.2ugpshRNA-survivin-387/孔），四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞分別于順鉑(2.0ug/ml)作用24h，36h，48h，60h后的增殖水平。
　　 結(jié)果：
　　 (1)各濃度轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組（與空白對(duì)照組比較，F(xiàn)=228.87，*q=14.21～38.21，p＜

4、0.01：與陰性對(duì)照組比較，＃q=10.45～34.4，p＜0.01)，高濃度轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡指數(shù)高于低濃度轉(zhuǎn)染組(F=228.87,q=23.99,p＜0.01)。
　　 (2)順鉑對(duì)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的細(xì)胞抑制率在24h，36h，48h，60h時(shí)明顯高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(F=235.88～910.86，q=28.04～52.28，p＜0.01)。
　　 結(jié)論：pshRNA-survivin-387轉(zhuǎn)染能顯著誘導(dǎo)人肝癌He