2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討未折疊蛋白反應(yīng)在再灌注肺凋亡中的作用,并分析其可能機制。
  方法:
  采用C57BL/6J小鼠在體單側(cè)肺原位缺血再灌注損傷模型。實驗小鼠70只,隨機分為7組,每組10只:假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(I/R組)、PBS+ Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑組(I/R+PBS+Lipo組)、陰性對照組(I/R+siRNASCR組)、 I/R+siRNACHOP組,I/R+siRNA

2、caspase-12組,I/R+siRNAJNK組。Sham組:只開胸不夾閉肺門,觀察3.5 h后處死并取左肺;I/R組缺血30 min,再灌注3 h;I/R+PBS+Lipo組:給予PBS溶液和Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑,余同I/R組;I/R+siRNASCR組:給予PBS溶液、Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑和Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑包裹的無關(guān)序列的siRNA(能進入RNAi途

3、徑,但無干擾作用),余同I/R組;I/R+siRNA組:給予PBS溶液、Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑和Lipofectamine2000TM轉(zhuǎn)染試劑包裹的不同目的siRNA,余同I/R組。于實驗前2天通過鼻飼法干擾小鼠。各組小鼠被處以安樂死,取左肺組織,進行肺組織光鏡檢測,檢測總肺水含量(TLW)、肺濕干重比(W/D)和肺泡細胞損傷定量指標(IQA),分別用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白免疫印跡法檢測CHOP、cas

4、pase-12、JNK基因水平的表達以及蛋白含量,通過電鏡觀察肺組織學改變,通過原位缺口末端標記法在顯微鏡下觀察肺組織凋亡細胞。
  結(jié)果:
  1.Sham組W/D、TLW及IQA值較之其他組有顯著性差異(P<0.05),為所有組中濕干重比值最低。經(jīng)CHOP-siRNA、caspase-12-siRNA、JNK-siRNA干預(yù)后,I/R+siRNACHOP組、I/R+siRNAcaspase-12組、I/R+siRNAJN

5、K組W/D、TLW及IQA值下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);
  2.Sham組肺泡細胞無腫脹,結(jié)構(gòu)完整,肺間質(zhì)未見炎性細胞漏出,無水腫滲出、增厚。I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組肺泡細胞腫脹、結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡間質(zhì)水腫、增厚,肺泡腔內(nèi)可見滲出、紅細胞漏出及炎性細胞漏出。與之相比,I/R+siRNACHOP組、I/R+siRNAcaspase-12組、I/R+siRNAJNK組肺泡結(jié)構(gòu)的紊亂程度減輕,可見

6、較完整的形態(tài),肺間質(zhì)及肺泡內(nèi)滲出減輕及炎性細胞較之減少;
  3.Sham組毛細血管基底膜無破壞,內(nèi)皮細胞未見腫脹,結(jié)構(gòu)完整清楚,Ⅱ型肺泡上皮細胞內(nèi)線粒體無腫脹,微絨毛豐富,板層小體數(shù)量未見減少。I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組細胞細胞膜上微絨毛減少或消失,胞漿濃縮,板層體減少、排空增多,線粒體腫脹,細胞核固縮并邊集在核膜下,可見較多炎性細胞浸潤附著在毛細血管內(nèi)壁及肺泡隔上。與上述3組相比,I/R+siRNA

7、CHOP組、I/R+siRNAcaspase-12組、I/R+siRNAJNK組肺組織在電鏡下可見損傷減輕,肺泡結(jié)構(gòu)超微結(jié)構(gòu)清晰可辨,核染色質(zhì)較均勻,胞漿增多,肺泡Ⅱ型上皮細胞表面微絨毛較多,板層小體數(shù)量增多,線粒體腫脹減輕;
  4.與Sham組相比I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組中的CHOP、caspase-12、JNK基因及CHOP、caspase-12、p-JNK蛋白水平均明顯表達(P<0.01)。I

8、/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組相比,CHOP、caspase-12、JNK分別在對應(yīng)的I/R+siRNACHOP組、I/R+siRNAcaspase-12組、I/R+siRNAJNK組中,其基因表達量和蛋白水平均下降(P<0.05或P<0.01);
  5.與Sham組相比,I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組細胞凋亡數(shù)量明顯增多, AI亦均明顯升高(P<0.01);各組兩兩比較,AI均無明

9、顯統(tǒng)計學差異(P>0.05);與I/R+PBS+Lipo組和I/R+SCR組相比,I/R+siRNACHOP組、I/R+siRNAcaspase-12組、I/R+siRNAJNK組細胞凋亡減少,AI均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。
  結(jié)論:
  I/R引起小鼠肺組織細胞發(fā)生過度的UPR,并通過UPR信號轉(zhuǎn)導通路引起細胞凋亡,損傷肺組織;抑制CHOP、caspase-12、JNK凋亡途徑可減輕PIRI

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