紡錘體和動(dòng)粒關(guān)聯(lián)蛋白-1基因在口腔鱗癌中的表達(dá)及其致癌機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩111頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、口腔腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤是口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cellcarcinoma,OSCC)。目前,手術(shù)切除仍是主要的治療方式。但大多數(shù)患者是在晚期才被診斷,且預(yù)后較差。其主要原因在于口腔鱗狀細(xì)胞癌容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移??谇击[狀細(xì)胞癌在發(fā)生轉(zhuǎn)移與其具有快速增殖的能力有著密切的關(guān)系。因此,有效地抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是治療口腔鱗癌的關(guān)鍵。
  有絲分裂過(guò)程中,染色體分裂異常是產(chǎn)生遺傳不穩(wěn)定性繼而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的重要原

2、因。紡錘體和動(dòng)粒關(guān)聯(lián)蛋白(Spindle and Kinetochroe Associatedcomplex SKA),在有絲分裂中期使紡錘體微管穩(wěn)定地附著在動(dòng)粒(kinetochore,KT)上,從而確保有絲分裂的順利完成。SKA蛋白復(fù)合體包含SKA1、SKA2和SKA3三個(gè)亞基。已有研究表明,SKA2與SKA3均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),然而,關(guān)于SKA1在腫瘤惡性進(jìn)展中的調(diào)節(jié)功能尚無(wú)報(bào)道。本文旨在研究SKA1是否是調(diào)節(jié)口腔鱗癌的惡性增

3、殖的一個(gè)關(guān)鍵分子。
  本課題首先收集并采用免疫組化方法研究了SKA1基因在36例口腔鱗癌組織中和31例非腫瘤組織或癌旁組織中的表達(dá)。其次,采用表達(dá)SKA1短發(fā)夾RNA(shRNA)的慢病毒顆粒沉默SKA1基因的表達(dá),觀察其在口腔鱗腺癌細(xì)胞中的分子機(jī)制;通過(guò)RT-PCR及western-blot分別檢測(cè)SKA1 mRNA和蛋白水平的沉默效率。采用MTT、克隆形成實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞儀分別觀察LV-shSKA1對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆形成和細(xì)胞周

4、期調(diào)控的影響。為了進(jìn)一步深入研究SAK1調(diào)節(jié)口腔鱗癌惡性增殖的分子機(jī)制,應(yīng)用Agilent公司的人全基因組芯片檢測(cè)SKA1基因沉默前后CAL-27細(xì)胞基因表達(dá)譜的變化,并選擇部分差異表達(dá)≧2倍的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)驗(yàn)證。
  研究發(fā)現(xiàn),SKA1蛋白在口腔鱗癌中呈陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)部位為胞漿胞膜,部分切片有少量核染色??谇话┑?6個(gè)樣本中的免疫組化的陽(yáng)性率為88.9%(32/36),強(qiáng)陽(yáng)性率

5、為25%(9/36);31例非腫瘤組織或癌旁組織中SKA1蛋白的陽(yáng)性率為0%(0/31),弱陽(yáng)性率為9.6%(3/31),結(jié)果證明SKA1在口腔鱗癌高表達(dá)。LV-shSKA1可高效感染CAL-27細(xì)胞,并有效沉默SKA1 mRNA及蛋白的表達(dá);MTT、克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,靶基因SKA1沉默后,口腔鱗癌細(xì)胞的增殖能力顯著減弱,克隆性生長(zhǎng)能力顯著降低,并使S期的細(xì)胞顯著降低,G0/G1和G2/M期的細(xì)胞顯著增多。該研究結(jié)果

6、提示,LV-shSKA1能有效沉默口腔鱗癌細(xì)胞中SKA1基因的表達(dá),同時(shí)顯著抑制細(xì)胞的增殖能力并影響細(xì)胞周期分布;基因芯片結(jié)果顯示,差異表達(dá)基因變化倍數(shù)≧2倍以上的基因有著絲粒復(fù)合體NDC80、周期素依賴激酶抑制劑CDKN1B和孤兒受體GPR110等,Real-time PCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因的表達(dá)與基因芯片結(jié)果一致。
  綜上所述,口腔鱗癌組織中SKA1蛋白表達(dá)增高,沉默SKA1基因的表達(dá),可導(dǎo)致細(xì)胞增殖潛能和克隆形成能力顯著抑

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論