抑郁大鼠觸液核MKP-1的表達(dá)及其功能探討.pdf

1、目的：觀察fos和蛋白絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)在正常及抑郁大鼠中觸液核(cerebrospinal fluid-contacting nucleus，CSF-CN)的表達(dá)情況及毀損觸液核團(tuán)對抑郁大鼠行為學(xué)的影響，探討觸液核的功能及抑郁發(fā)病的可能機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)用SD大鼠隨機(jī)分為四組：
　　A組，即正常組，除稱重外，無其它額外刺激；B組，即抑郁組，以經(jīng)典的慢性強(qiáng)迫游泳法建立抑郁模型；C組，即毀損組，提前8

2、天側(cè)腦室注入神經(jīng)元特異性毀損劑CTB-SAP后，繼續(xù)以B組相同方法進(jìn)行慢性強(qiáng)迫游泳；D組，即溶媒組，側(cè)腦室注入與毀損劑相同體積的溶媒，其余與C組相同，并檢測行為學(xué)表現(xiàn)。通過測定動物7，14，21，28d體重增長率，及造模前后糖水偏好(sucrose preference)，曠場分析(open field test，OPT)，游泳實(shí)驗(yàn)(Forced Swim Test，F(xiàn)ST)等，進(jìn)行數(shù)據(jù)比較，作為確認(rèn)大鼠抑郁模型建立成功的指標(biāo)及毀損觸液

3、核后行為改善與否的依據(jù)。
　　A，B組處死前48小時，側(cè)腦室注射CB-HRP，以標(biāo)記觸液核的遠(yuǎn)位觸液神經(jīng)元。將免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，觀察CB-HRP/fos和CB-HRP/MKP-1在正常大鼠觸液核的分布及在抑郁形成后(第28天)的變化。Image-Pro Plus圖像計數(shù)軟件用于計算目標(biāo)神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)目。
　　結(jié)果：1.正常大鼠觸液核CB-HRP/fos和CB-HRP/MKP-1的分布

4、>　　正常大鼠可見CB-HRP/fos和CB-HRP/MKP-1陽性雙重標(biāo)記細(xì)胞，計數(shù)分別為60±9和315±13。
　　2.抑郁下大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)及觸液核CB-HRP/fos和CB-HRP/MKP-1的變化
　　(1)造模結(jié)束后，第28天抑郁大鼠體重增長率為32.3±1.9％，糖水消耗量為4.14±0.26g，曠場得分為(水平24.33±2.94，直立2.67±0.23)，與正常組體重增長率48.8±0.7％，糖水消耗8.

5、17±0.21g，曠場得分(水平61.83±7.2，直立17.33±3.21)相比，明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(2)抑郁組經(jīng)過慢性強(qiáng)迫游泳28天(CFSS)可見大量CB-HRP/fos(620±51)，CB-HRP/MKP-1(560+45)神經(jīng)元。
　　3.毀損組行為學(xué)變化及毀損神經(jīng)元形態(tài)的改變
　　(1)毀損組，第28天抑郁大鼠體重增長率為40.2±1.2％，糖水消耗量為7.82±0.14g

6、，曠場得分為(水平45.17±6.0，直立8.67±1.25)，明顯高于抑郁組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　(2)側(cè)腦室注入毀損劑CTB-SAP，第8天免疫熒光單標(biāo)可見大部分觸液神經(jīng)元凋亡，個數(shù)顯著減少，未見軸突，僅剩殘余片段，毀損效果確切。
　　結(jié)論：1.fos和MKP-1在大鼠觸液神經(jīng)核團(tuán)有分布
　　2.fos和MKP-1在抑郁條件下表達(dá)增加。
　　3.毀損觸液核導(dǎo)致大鼠對抑郁刺激不敏感，提示腦實(shí)