MKP-1表達(dá)與UT-B基因敲除小鼠抑郁樣行為的關(guān)系.pdf

1、目的:研究尿素通道蛋白B(Urea transporter B UT-B)基因敲除對(duì)小鼠自主行為的影響;以及小鼠海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，海馬組織內(nèi)尿素和NO含量、MKP-1表達(dá)部位及水平的改變，以及MAPK信號(hào)分子的表達(dá)水平變化，探討UT-B基因敲除小鼠出現(xiàn)抑郁樣行為的分子機(jī)制。
　　 方法:1.8-12周齡體重匹配，雌性野生型和UT-B基因敲除小鼠各20只，分別進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)野生型小鼠和UT-B

2、基因敲除小鼠的自主行為。2.采用HE染色和免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察兩型小鼠海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)以及MKP-1的表達(dá)。3.采用尿素和NO檢測(cè)試劑盒測(cè)定兩型小鼠海馬尿素和NO水平。4.采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)兩型海馬MKP-1、MAPKs相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:1.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間分別為（86±13s）和（123±19s），UT-B基因敲除小鼠的游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)

3、(P=0.0012＜0.05)。2.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠開(kāi)臂停滯時(shí)間分別為（74.79±13.70）s和（12.71±3.170）s(P=0.0109＜0.05);進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)分別為（12.50±1.645）和（4.75±0.56）(P=0.0021＜0.05);進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)與總?cè)氡鄞螖?shù)百分比分別為（58.63±4.28）％和（27.25±3.29）％(P=0.0009＜0.05);開(kāi)臂停滯時(shí)間與總

4、時(shí)間百分比分別為（31.61±6.71）％和（7.69±2.30）％（P=0.0426＜0.05）。3.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間分別為（32.08±7.96）s和（13.50±2.96）s(P=0.025＜0.05);中央?yún)^(qū)域活動(dòng)路程分別為（873.5±137.1）mm和(594.8±190.8) mm(P=0.778＞0.05);總路程分別為（10110±756.3）mm和（13770±84

5、4.7）mm（P=0.025＜0.05），UT-B基因敲除小鼠在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間明顯減少，運(yùn)動(dòng)頻率高。提示其具有抑郁樣行為。4.UT-B基因敲除小鼠海馬各亞區(qū)神經(jīng)元密度減小，神經(jīng)元MKP-1的表達(dá)水平上調(diào)。5.UT-B基因敲除和野生型小鼠海馬尿素水平為（16.7±2.0 mM vs11.6±1.4 mM，p=0.004＜0.001），NO含量為(1.05±0.07μmol/gprot vs1.29±0.06μmol/gprot，p=0.

6、04＜0.05)，表明UT-B基因敲除小鼠海馬尿素水平顯著升高而NO含量明顯降低。6.UT-B基因敲除小鼠海馬MKP-1表達(dá)水平上調(diào)531.9％，pERK和pJNK表達(dá)水平明顯降低39.1％和21.3％，磷酸化p38 MAPK水平無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論:1.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示UT-B基因敲除小鼠具有抑郁樣行為。2.UT-B基因敲除引起小鼠海馬神經(jīng)元減少，尿素堆積，NO含量減少。3.UT-B基因敲除