姜黃提取物對(duì)小鼠腦缺血再灌注擬血管性癡呆治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 血管性癡呆(VD)是指腦血管疾病引起的智能及認(rèn)知功能障礙臨床綜合征。臨床表現(xiàn)以伴發(fā)腦血管病而發(fā)生癡呆為特征。屬中醫(yī)學(xué)老年呆病范疇。隨社會(huì)老齡化的發(fā)展，VD發(fā)病率也在逐年上升，嚴(yán)重影響著老年人的生活質(zhì)量。因此，深入探討VD的病理機(jī)制，開發(fā)、研制防治VD的有效藥物具有重要意義。中醫(yī)藥以其獨(dú)特的理論體系及豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，在防治VD方面表現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察姜黃提取物對(duì)擬血管性癡呆小鼠行為學(xué)、病理學(xué)改變及血清、腦組織中超氧化

2、物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、內(nèi)皮素(ET)、乙酰膽堿酯酶(AchE)、谷氨酸(Glu)、鈣離子(Ca<'2+>)等含量的影響，探討姜黃提取物治療血管性癡呆的作用機(jī)制，為臨床治療VD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 選取清潔級(jí)昆明種雄性健康小鼠，采用腦缺血再灌注合并尾部放血降壓制備擬血管性癡呆小鼠模型：造模時(shí)將小鼠用水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，消毒，頸正中切口，

3、體視顯微鏡下分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，套“4”號(hào)絲線扣備用。拉緊絲扣，阻斷血流20 min，同時(shí)在距尾尖1 cm處剪斷放血約0.3 mL，熱凝止血。松開絲扣灌注10 min后，再次阻斷血流20 min，第2次再灌后觀察30 min，縫合皮膚。術(shù)后每日肌注青霉素0.2萬U，連續(xù)3d。其中假手術(shù)組只分離頸總動(dòng)脈，套絲扣，但不阻斷血流，尾部不放血，觀察時(shí)間等與其它組相同。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為6組，每組13只。分別為假手術(shù)組、模型組、陽性藥喜得鎮(zhèn)組

4、(0.7mg/kg)、姜黃提取物低劑量組(50mg/kg)、姜黃提取物中劑量組(100mg/kg)、姜黃提取物高劑量組(200mg/kg)。連續(xù)用藥20d后，利用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)觀察小鼠行為學(xué)變化。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分批斷頭處死小鼠，冰盤上快速剖取全腦，棄去嗅球及小腦。每組隨機(jī)取3個(gè)全腦用10％甲醛溶液固定，留作組織切片進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察；其余大腦用冰生理鹽水沖洗血液，再用濾紙拭干，電子天平稱重后加入9倍冷生理鹽水，在玻璃勻漿器中研磨成10％勻漿

5、，離心15 min(4℃，3000 r/min)，提取上清液，-20℃凍存待檢。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定小鼠血清及腦組織中SOD活力，硫代巴比妥酸比色分析法測(cè)定MDA含量，采用放射免疫學(xué)方法檢測(cè)CGRP和ET含量，AchE、Glu及Ca<'2+>等含量測(cè)定亦嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。 結(jié)果： 1、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)的影響(跳臺(tái)法)模型組(學(xué)習(xí)：1.54±1.13；記憶：1.08±0.64)同假手術(shù)組(

6、學(xué)習(xí)：0.31±0.48；記憶：0.22±0.44)相比，無論是學(xué)習(xí)成績(jī)還是記憶成績(jī)，小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)均明顯增多(P<0.01)，模型組(155.33±104.58)學(xué)習(xí)成績(jī)的反應(yīng)期較假手術(shù)組(11.23±9.39)明顯延長(P<0.01)，模型組(38.85±26.45)記憶成績(jī)的潛伏期較假手術(shù)組(280.82±47.04)明顯縮短(P<0.01)；姜黃提取物低劑量組(學(xué)習(xí)成績(jī)：反應(yīng)期43.62±23.55，錯(cuò)誤次數(shù)0.90±0.76：

7、記憶成績(jī)：潛伏期193.27±72.59，錯(cuò)誤次數(shù)0.51±0.47)、姜黃提取物中劑量組(學(xué)習(xí)成績(jī)：反應(yīng)期36.14±15.41，錯(cuò)誤次數(shù)0.62±0.45；記憶成績(jī)：潛伏期231.89±82.13，錯(cuò)誤次數(shù)0.45±0.52)、姜黃提取物高劑量組(學(xué)習(xí)成績(jī)：反應(yīng)期33.50±15.67，錯(cuò)誤次數(shù)0.56±0.51；記憶成績(jī)：潛伏期253.67±90.71，錯(cuò)誤次數(shù)0.33±0.50)、喜得鎮(zhèn)組(學(xué)習(xí)成績(jī)：反應(yīng)期34.43±32.51

8、，錯(cuò)誤次數(shù)0.53+0.52；記憶成績(jī)：潛伏期241.35±77.82，錯(cuò)誤次數(shù)0.31±0.48)各用藥組與模型組比較，小鼠學(xué)習(xí)記憶成績(jī)有明顯提高，表現(xiàn)為小鼠反應(yīng)期縮短，潛伏期延長，錯(cuò)誤次數(shù)減少，差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)。提示姜黃提取物可改善擬血管性癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。 2、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠血清及腦組織中SOD、MDA含量的影響模型組(血清SOD：83.64±11.87，腦組織SOD：77.

9、44±10.51；血清MDA：8.52±1.17，腦組織MDA：855.75±141.36)同假手術(shù)組(血清SOD：97.68±10.62，腦組織SOD：102.35±9.47；血清MDA：6.05±0.94，腦組織MDA：691.40±48.96)相比，小鼠血清及腦組織中SOD活力明顯下降，MDA含量明顯升高，差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)；與模型組比較，姜黃提取物低劑量組(血清SOD：86.39±13.37，腦組織S

10、OD：84.80±4.76；血清MDA：7.56±1.30，腦組織MDA：804.38±156.07)、姜黃提取物中劑量組(血清SOD：95.15±7.35，腦組織SOD：87.60±6.29；血清MDA：6.51±0.86，腦組織MDA：748.01±100.43)、姜黃提取物高劑量組(血清SOD：96.71±8.17，腦組織SOD：88.85±6.17；血清MDA：6.46±0.64，腦組織MDA：720.31±138.08)、喜得

11、鎮(zhèn)組(血清SOD：84.11±28.86，腦組織SOD：86.20±5.20；血清MDA：7.01±1.07，腦組織MDA：736.99±101.21)各給藥組小鼠血清及腦組織中SOD活性明顯升高，同時(shí)MDA水平降低，表明姜黃提取物可對(duì)抗自由基引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，對(duì)反復(fù)缺血再灌小鼠氧自由基代謝紊亂有調(diào)節(jié)作用。 3、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠血清及腦組織中ET、CGRP含量的影響模型組(血清ET：39.87±9.47，腦組織ET

12、：6.12±1.13；血清CGRP：22.26±3.77，腦組織CGRP：153.41±20.61)同假手術(shù)組(血清ET：28.81±4.25，腦組織ET：4.71±0.74；血清CGRP：41.98±9.31，腦組織CGRP：183.96±30.19)比較，小鼠血清及腦組織ET含量明顯升高，CGRP含量明顯下降，差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)，與模型組相比，姜黃提取物低劑量組(血清ET：38.34±10.12，腦組織E

13、T：5.71±1.18；血清CGRP：23.77±3.40，腦組織CGRP：169.16±49.15)、姜黃提取物中劑量組(血清ET：32.15±5.12，腦組織ET：4.93±1.18；血清CGRP：28.13±5.89，腦組織CGRP：175.92±22.88)、姜黃提取物高劑量組(血清ET：31.13±5.57，腦組織ET：4.50±0.77；血清CGRP：29.16±2.98，腦組織CGRP：182.15±42.93)、喜得鎮(zhèn)組

14、(血清ET：35.88±6.46，腦組織ET：5.18±1.26；血清CGRP：27.84±5.20，腦組織CGRP：174.68±17.48)各用藥組小鼠血清及腦組織中ET含量降低，同時(shí)CGRP水平升高，表明姜黃提取物可改變模型小鼠舒縮血管物質(zhì)含量，改善腦組織血液供應(yīng)。 4、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠腦組織中AchE含量的影響模型組(0.4291±0.0589)同假手術(shù)組(0.6064±0.0710)相比，小鼠腦組織中AchE

15、含量明顯下降(P<0.01)；與模型組比較，姜黃提取物低劑量組(0.5846±0.0529)、姜黃提取物中劑量組(0.5560±0.0785)、姜黃提取物高劑量組(0.4984±0.0836)、喜得鎮(zhèn)組(0.5429±0.0589)各給藥組中AchE含量明顯上調(diào)(P<0.01或P<0.05)，表明姜黃提取物可調(diào)節(jié)腦組織中AchE的活力。 5、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠腦組織中Glu含量的影響模型組(0.0952±0.0127)同

16、假手術(shù)組(0.0649±0.0045)相比，小鼠腦組織中Glu含量明顯上升(P<0.01)；與模型組比較，姜黃提取物低劑量組(0.0737±0.0045)、姜黃提取物中劑量組(0.0627±0.0062)、姜黃提取物高劑量組(0.0693±0.0062)、喜得鎮(zhèn)組(0.0720±0.0072)各給藥組小鼠腦組織中Glu含量顯著降低(P<0.01)，表明姜黃提取物可降低腦組織興奮性氨基酸含量。 6、姜黃提取物對(duì)血管性癡呆小鼠血清中

17、Ca<'2+>含量的影響模型組(1.354±0.068)同假手術(shù)組(1.266±0.108)相比，小鼠血清中Ca<'2+>含量明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，姜黃提取物低劑量組(1.332±0.111)、姜黃提取物中劑量組(1.317±0.105)、姜黃提取物高劑量組(1.273±0.104)、喜得鎮(zhèn)組(1.328±0.160)各給藥組小鼠血清中Ca<'2+>含量均有所下降，以大劑量組效果顯著(P<0.05)，提示姜黃提取物可減