小白菊內(nèi)酯對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲及遷移的影響及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 肝癌是我國(guó)常見(jiàn)的一種惡性腫瘤之一,肝癌的侵襲與遷移是影響患者預(yù)后的重要因素。近年來(lái)小白菊內(nèi)酯(parthenolidc,PAR)作為轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的有效抑制劑,其抗腫瘤作用得到認(rèn)可。但國(guó)內(nèi)外關(guān)于PAR對(duì)肝癌作用的研究還不深入。已有研究表明PAR具有抑制肝癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的作用。本文旨在探討小白菊內(nèi)酯對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲與遷移的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、MTT法檢測(cè)PAR對(duì)肝

2、癌細(xì)胞增殖抑制的影響
　　 培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株Bel-7402細(xì)胞株,加入96孔板,實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的PAR,對(duì)照組則加等量不含藥物的培養(yǎng)液。PAR處理24h、48h后,MTT法檢測(cè)各孔吸光度(OD)值,計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。
　　 2、Transwell小室檢測(cè)PAR對(duì)肝癌細(xì)胞體外遷移的影響
　　 以不同濃度PAR處理細(xì)胞后,加入到transwell小室中,作用24h、48h后計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)。
　　 3、

3、被覆Matrigel膠的transwell小室檢測(cè)PAR對(duì)肝癌細(xì)胞體外侵襲的影響
　　 以不同濃度PAR處理細(xì)胞后,加入到transwell小室中,小室上層被覆Matrigel膠,作用24h、48h后計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)。
　　 4、Westernblot方法檢測(cè)VEGF、MMP-9蛋白的表達(dá)
　　 收集PAR0μmol/L,20μmol/L,401μmol/L,60μmol/L,作用24h、48h后的細(xì)胞蛋白,用we

4、sternblot方法檢測(cè)VEGF、MMP-9蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、PAR對(duì)肝癌細(xì)胞增殖抑制作用
　　 PAR在40μmol/L-100μmol/L濃度區(qū)間內(nèi)以時(shí)間依賴方式抑制BeL-7402細(xì)胞增殖。PAR在5μmol/L-100μmol/L檢測(cè)濃度范圍內(nèi)隨著PAR濃度的增加,對(duì)BeL-7402細(xì)胞抑制率顯著增加,呈量效關(guān)系(P＜0.05),PAR以濃度依賴的方式抑制BeL-7402細(xì)胞增殖。<

5、br>　　 2、PAR對(duì)肝癌BeL7402細(xì)胞體外遷移的影響
　　 Transwell結(jié)果表明Bel-7402細(xì)胞正常對(duì)照組24h、48h后穿膜細(xì)胞數(shù)分別為121.33±9.61,169.00±5.57。經(jīng)20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR處理24h后,穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少,分別為105.00±9.85(p＜0.05),69.33±5.51(p＜0.05),49.67±8.62(p＜0.05)。經(jīng)20μ

6、mol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR處理48h后,穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少,分別為94.33±8.02(p＜0.05),50.67±7.51(p＜0.05),24.67±4.04(p＜0.05)。結(jié)果表明PAR以濃度依賴方式抑制肝癌細(xì)胞體外遷移活性。PAR在40pmol/L-60μmol/L濃度區(qū)間內(nèi)以時(shí)間依賴方式降低肝癌細(xì)胞體外遷移能力。
　　 3、PAR對(duì)肝癌BeL-7402細(xì)胞體外侵襲的影響
　　 Tr

7、answell結(jié)果表明Bel-7402細(xì)胞正常對(duì)照組24h、48h后穿膜細(xì)胞數(shù)分別為96.33±5.13,154.67±12.01。經(jīng)20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR處理24h后,穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少,分別為84.00±9.54(p＜0.05),53.67±4.1(p＜0.05),33.00±4.36(p＜0.05)。經(jīng)20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的PAR處理48h后,穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少

8、,分別為68.33±7.09(p＜0.05),44.00±6.25(p＜0.05),14.33±3.06(p＜0.05)。結(jié)果表明PAR以濃度依賴方式抑制肝癌細(xì)胞體外侵襲活性。PAR在60μmol/L濃度時(shí),以時(shí)間依賴方式降低肝癌細(xì)胞體外侵襲能力。
　　 4、PAR對(duì)肝癌細(xì)胞VEGF及MMP-9蛋白表達(dá)的影響。
　　 對(duì)照組細(xì)胞經(jīng)westernblot檢測(cè)可見(jiàn)明顯的VEGF、MMP-9蛋白表達(dá),經(jīng)20μmol/L,40μ