高遷移率族蛋白B1對肝癌細胞侵襲能力的影響及機制的初步研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,根據(jù)最新統(tǒng)計,全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬,居惡性腫瘤的第五位。關(guān)于HMGB1與肝細胞癌關(guān)系的研究也已開展。有研究表明HMGB1在胃癌、食管癌、胰腺癌、結(jié)腸癌中表達增高,但具體作用機制尚不明確。本實驗研究,我們通過檢測肝癌、癌旁組織及正常肝組織中HMGB1的表達情況,并使用RNA干擾技術(shù)合成針對高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的siRNA,觀察其對人肝癌細胞株HepG2侵襲遷移能力的影響,

2、并對其意義及機制進行探討分析。
　　方法：(1)收集取病理證實的肝細胞癌組織標本10例,另選取經(jīng)病理證實為肝細胞癌癌旁的正常肝組織10例作為對照。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)及蛋白印跡法(Western blot)檢測肝癌與癌旁組織、人肝癌細胞株HepG2與正常肝細胞株L-02中HMGB1表達的差異;(2)RNA干擾技術(shù)合成3對特異性針對HMGB1的HMGB1-siRNA并轉(zhuǎn)染HepG2,設置空白組與對照組,并使用Wes

3、tern blot技術(shù)檢測沉默效果;(3)選擇沉默效果最好的HMGB1-siRNA,應用跨膜遷移實驗、平面遷移實驗檢測細胞侵襲遷移能力的變化;(4)通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)及蛋白印跡法(Western blot)方法進一步分別測定HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染進入HepG2后的MMP2、MMP9、ICAM1和TIMP2的mRNA和蛋白表達水平。
　　結(jié)果：實驗結(jié)果表明肝癌組織較癌旁組織HMGB1表達水平明顯增加,肝癌細

4、胞株HepG2較正常肝細胞株L-02中HMGB1也明顯增高(均P<0.05);HMGB1-siRNA轉(zhuǎn)染后可明顯降低HepG2中HMGB1的表達,其中HMGB1-siRNA-1的沉默效率最高(P<0.05),用40nM的HMGB1-siRNA-1對HMGB1的抑制效率在24、48、72h均達80％以上,96h后明顯下降(均P<0.05);用40nM的HMGB1-siRNA-1轉(zhuǎn)染HepG2,24h后HepG2細胞遷移和侵襲能力下降(均P

5、<0.05)。轉(zhuǎn)染后MMP2、MMP9、ICAM1的mRNA表達明顯下調(diào),而TIMP2的mRAN表達明顯上調(diào)(均P<0.05)。
　　結(jié)論：HMGB1在肝癌中高表達,可促進肝癌細胞的侵襲遷移,通過HMGB1-siRNA抑制肝癌細胞中HMGB1表達可明顯降低腫瘤細胞侵襲遷移能力。HMGB1表達抑制后,MMP2、MMP9、ICAM1表達下調(diào),TIMP2表達上調(diào),說明HMGB1對肝癌細胞的侵襲遷移能力與MMP2、MMP9、ICAM1和T