MiNA-1對(duì)食管鱗癌細(xì)胞KYSE510增殖、侵襲的影響及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一。根據(jù)世界癌癥發(fā)病與死亡報(bào)告，全球2008年食管癌發(fā)病大約為48.16萬例，全球死亡大約為40.65萬例[1]。食管癌的流行病學(xué)特征表現(xiàn)為:不同地區(qū)、國家、種族、性別的食管癌發(fā)病率和死亡率有明顯差異。全球以亞、非、拉一些國家和地區(qū)發(fā)病較高，歐美和大洋洲發(fā)病偏低，我國更是食管癌的高發(fā)區(qū)，且死亡率高，區(qū)域之間發(fā)病率與死亡率差異顯著[2]。消化道腫瘤患者之中存在著異miRNA表達(dá)[3]，Konishi[4]

2、等利用RT-PCR技術(shù)對(duì)106例食管癌及54名志愿者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)食管癌患者血清中miRNA-18a的表達(dá)量明顯高于正常人，大約為正常人的16倍，食管癌組織miRNA-18a的表達(dá)量明顯高于周圍正常組織，食管癌術(shù)后患者血清中miRNA-18a的表達(dá)量明顯低于術(shù)前患者表達(dá)水平。目前多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)告局限于miRNA在ESCC中的表達(dá)，其作用機(jī)制并未明確闡述。本課題研究了miRNA-1對(duì)食管鱗癌細(xì)胞體外增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，并探討了其可能的相關(guān)機(jī)

3、制。miRNA是一類內(nèi)生性的由長度大約20-22個(gè)核苷酸組成的非編碼的小分子RNA[5]。miRNA在細(xì)胞代謝、化生、增殖和凋亡過程中發(fā)揮了不容忽視的生物作用。多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與miRNA有著極其密切的關(guān)系，miRNA對(duì)于腫瘤的早期臨床診斷及提供新的臨床治療策略具備極其重要的新的潛在用途[13]。
　　目的:通過過表達(dá)/沉默miRNA-1，檢測(cè)miRNA-1在食管鱗癌細(xì)胞KYSE510增殖、遷移和侵襲速度。并檢測(cè)其相關(guān)的靶基因L

4、ASP1與TAGLN2蛋白水平變化，以探討miRNA-1對(duì)食管鱗癌可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，KYSE510細(xì)胞中過表達(dá)miRNA-1的mimics-miR-1組（轉(zhuǎn)染含miR-1模擬物的mimics試劑）為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為mimics-miR-1 control組（轉(zhuǎn)染不含miR-1模擬物的mimics模擬試劑，此模擬試劑其他成分與mimics一致）;KYSE510細(xì)胞中沉默 miRNA-1表

5、達(dá)的inhibitor-miR-1組（轉(zhuǎn)染含miR-1抑制物的inhibitor試劑）為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為inhibitor-miR-1 control組（轉(zhuǎn)染不含miR-1抑制物的inhibitor模擬試劑）。
　　2、應(yīng)用MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)觀察miR-1在KYSE510細(xì)胞中過表達(dá)/沉默對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　3、應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察miR-1在KYSE510細(xì)胞過表達(dá)/沉默后對(duì)細(xì)胞遷移及侵襲的影響。

6、　　4、應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)LASP1及TAGLN2蛋白表達(dá)變化，探討miRNA對(duì)食管癌細(xì)胞株KYSE510的分子作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1、MTT細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果
　　1.1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異
　　實(shí)驗(yàn)組（mimics-miR-1組）24h、48h、72hOD值分別為0.894±0.023、1.050±0.013、1.232±0.017低于對(duì)照組（mimics-miR-1 control組）

7、的0.963±0.022、1.163±0.030、1.377±0.024;實(shí)驗(yàn)組（inhibitor-miR-1組）24h、48h、72hOD值分別為1.114±0.036、1.390±0.062、1.558±0.030高于對(duì)照組（inhibitor-miR-1 control組）的0.968±0.067、1.209±0.027、1.410±0.023,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明
　　miR-

8、1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)抑制KYSE510增值，miR-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默促進(jìn)KYSE510增值。
　　2、Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　2.1遷移實(shí)驗(yàn)
　　實(shí)驗(yàn)組(mimics-miR-1組)Transwell小室遷徙實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為112±24低于對(duì)照組(mimics-miR-1 control組)的230±32;實(shí)驗(yàn)組(inhibitor-miR-1組)Tran

9、swell小室遷徙實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為181±29高于對(duì)照組（inhibitor-miR-1 control組）的130±25，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.2侵襲實(shí)驗(yàn)
　　實(shí)驗(yàn)組(mimics-miR-1組)Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為125±31低于對(duì)照組（mimics-miR-1 control組）的204±42，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組（inhibitor-mi

10、R-1組）Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)24h遷移細(xì)胞數(shù)目為235±36，高于對(duì)照組(inhibitor-miR-1 control組)的116±25，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明
　　miR-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)時(shí)KYSE510遷移侵襲能力下降，miR-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默時(shí)KYSE510遷移侵襲能力增強(qiáng)。
　　3 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果<

11、br>　　3.1 LASP1蛋白表達(dá)水平變化
　　實(shí)驗(yàn)組（mimics-miR-1組）LASP1蛋白表達(dá)量為0.498±0.020，低于對(duì)照組（mimics-miR-1 control組）表達(dá)量0.642±0.070;實(shí)驗(yàn)組（inhibitor-miR-1組）LASP1蛋白表達(dá)量為0.626±0.050，高于對(duì)照組（inhibitor-miR-1 control組）表達(dá)量0.526±0.030，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。<

12、br>　　3.2 TAGLN2蛋白表達(dá)水平變化
　　實(shí)驗(yàn)組(mimics-miR-1組)TAGLN2蛋白表達(dá)量為0.370±0.020，低于對(duì)照組（mimics-miR-1 control組）表達(dá)量0.426±0.030;實(shí)驗(yàn)組（inhibitor-miR-1組）TAGLN2蛋白表達(dá)量為0.541±0.050，高于對(duì)照組（inhibitor-miR-1 control組）表達(dá)量0.421±0.051，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

13、)。
　　3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明
　　miR-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510過表達(dá)時(shí)LASP1、TAGLN2蛋白表達(dá)量降低，miR-1在ESCC細(xì)胞株KYSE510表達(dá)沉默時(shí)LASP1、TAGLN2蛋白表達(dá)量升高。
　　結(jié)論:
　　1、miR-1在食管癌細(xì)胞中過表達(dá)時(shí)食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力降低;miR-1在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)沉默時(shí)食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力提