羅非魚海豚鏈球菌疫苗的研制及免疫效果的初步研究.pdf

1、海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)病是水生動物的一種重要細菌性疾病，可感染多種海水和淡水魚類，在世界許多國家均有該病的暴發(fā)和流行，對漁業(yè)生產造成巨大危害。該病主要集中在地中海、中亞、東南亞和澳大利亞等地區(qū)，近年來我國海豚鏈球菌病暴發(fā)呈上升趨勢。海豚鏈球菌不僅是引起魚類鏈球菌病的主要病原，而且對食品安全和人類健康構成了威脅，該菌可引發(fā)人類蜂窩織炎、心內膜炎、關節(jié)炎、腦膜炎、脊髓炎等。該病目前主要靠用化學藥物進行防治，但化

2、學療法有很多弊端，相比而言疫苗接種對養(yǎng)殖環(huán)境和人類健康是安全的，因此被認為是防治細菌性疾病的最重要的方法之一。目前國外已有很多學者已開展了海豚鏈球菌疫苗的研究和探索并取得了一定成效，但國內尚未見疫苗研究的相關報道。 廣西是羅非魚養(yǎng)殖的主要地區(qū)之一，魚類鏈球菌病造成的經濟損失和隨之帶來的藥物殘留及環(huán)境污染已嚴重影響廣西羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本研究從廣西各地發(fā)病的羅非魚體內分離出了9株鏈球菌，采用傳統(tǒng)方法和分子生物學方法相結合的手

3、段對分離的致病性菌株進行了詳細鑒定，最終確定8株為為海豚鏈球菌，證明海豚鏈球菌是廣西羅非魚鏈球菌病的主要病原；選取3株具有區(qū)域代表性的菌株對羅非魚先后進行不同劑量的兩次攻毒試驗，選擇具有較好免疫原性和交叉免疫保護力的菌株做為疫苗候選菌株，并采用福爾馬林常規(guī)滅活的方法制備了滅活疫苗。本研究對研制的滅活疫苗進行了羅非魚免疫后的免疫應答和保護效果的初步研究。通過不同免疫途徑(注射、浸泡、口服)和免疫劑量對羅非魚進行免疫效果試驗；并在免疫前和免

4、疫后的不同時間里對試驗魚進行尾靜脈采血，通過測定血液中白細胞的數量、各類白細胞的含量及其吞噬活性，血清的抗菌活力、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力及抗體水平。實驗證明經過疫苗免疫的羅非魚對致病性海豚鏈球菌的抵抗力明顯增強，具有很高的相對保護率，注射組的相對保護率高達90％以上；研究結果還表明，疫苗免疫后白細胞總數、淋巴細胞、嗜中性粒細胞和單核細胞數量均顯著高于對照組(P<0.05)，血細胞的吞噬活性明顯增強。血清的抗菌活力、溶菌酶活性和抗

5、體水平與對照組差異顯著(P<0.05)，其中注射免疫組羅非魚的免疫能力提高最明顯，浸泡和口服免疫的羅非魚其免疫能力也有不同程度的提高。研究結果證明本研究制備的羅非魚海豚鏈球菌疫苗是有效的，可以通過合適的免疫途徑對羅非魚進行免疫接種海豚鏈球菌疫苗來預防該病的感染和暴發(fā)。 本研究還對羅非魚的血清免疫球蛋白(immunoglobulin)進行了純化和初步分析，確定了羅非魚血清免疫球蛋白的分子量，為羅非魚免疫球蛋白結構的進一步研究奠定基