無乳鏈球菌微球疫苗制備及其對羅非魚免疫效果的研究.pdf

1、本試驗選用實驗室分離保存的無乳鏈球菌高免疫原性菌株作為制備微球疫苗菌株，先用福爾馬林滅活制備成水劑疫苗，進一步利用海藻酸鈉做為口服投遞載體，采用乳化復沉淀方法包裹無乳鏈球菌制備成微球口服疫苗。在制備的過程中對最佳菌液濃度進行了篩選，并對微球疫苗效果進行了初步研究。結果表明，制備微球疫苗的最佳菌濃度為3.0×109cfu/mL，制備的微球疫苗灌胃和投喂的免疫保護率可達70％和65％。
　　通過兩種方式免疫健康的吉富羅非魚，第一種免疫

2、方式為口服投喂，設4個試驗組，分別標記為微粒組(菌濃度3.0×109 cfu/mL)、菌體組(菌濃度3.0×109 cfu/mL)、空微粒組和對照組，免疫組分別用微球疫苗、菌體疫苗、空微球疫苗拌配合飼料連續(xù)免疫7d，間隔5d(投喂配合飼料)，加強免疫一周(投喂免疫飼料)；第二種免疫方式為浸泡+口服投喂，設4個試驗組，分別標記為浸泡+口服微粒組，浸泡+口服菌體組，浸泡組和對照組，免疫組試驗魚先用水劑疫苗浸泡20min，用配合飼料喂養(yǎng)1個月

3、，再用按口服投喂方式加強免疫羅非魚。免疫后每周對試驗魚進行尾靜脈采血，連續(xù)采血8周，測定羅非魚血清中抗體效價水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、過氧化氫酶活性；并測定56d后以相應菌株攻毒后的相對保護率。
　　結果顯示：無乳鏈球菌疫苗對羅非魚具有較強的免疫原性。(1)免疫組羅非魚血清中的抗體效價水顯著性提高(P<0.05)，口服投喂方式和浸泡+口服投喂方式的抗體效價最高分別達到1:64和1:128；(2)從第一次采樣開始，免疫組

4、羅非魚血清中的LSZ活力、SOD活力、CAT活力全部顯著高于同期對照組(P<0.05)；(3)口服投喂投喂免疫保護率：微粒組(68％)>菌體組(32％)>空微粒組(9％)；浸泡+口服投喂免疫保護率：浸泡+口服微粒組(73％)>浸泡+口服菌體組(60％)>浸泡組(46％)。
　　上述結果表明，有海藻酸鈉包被的疫苗免疫保護率高于沒有海藻酸鈉包被的疫苗，浸泡結合口服免疫能夠進一步提高對吉富羅非魚的免疫保護性；本研究所制備的無乳鏈球菌微球