環(huán)孢素固體分散體膠囊的研制及載體促吸收機(jī)理的研究.pdf

1、環(huán)孢素(cyclosporine A,CyA)是由11個親脂性氨基酸組成的中性環(huán)狀多肽,20世紀(jì)80年代以來被廣泛地應(yīng)用于臨床器官移植,用以提高移植后的存活率,已經(jīng)成為當(dāng)前最主要的免疫抑制劑之一。CyA因在水中幾乎不溶并受到腸道及肝臟中的代謝酶細(xì)胞色素P4503A4(CYP3A4)的代謝和腸道外向轉(zhuǎn)運載體蛋白P-糖蛋白(P-gp)的外排作用,而使口服生物利用度較低(20％-50％)。本文研制CyA固體分散體,并探討載體對CYP3A活性和

2、P-gp外排作用,以期通過提高CyA溶解度和溶出速度、載體對CYP3A活性和P-gp外排作用的抑制來提高該藥物的口服生物利用度。
　　 首先,以泊洛沙姆407(F127)、泊洛沙姆188(1F68)、硬脂酸聚烴氧(40)酯(PS)及PVPK-29/32為載體,以溶劑法及溶劑-熔融法制備了CyA固體分散體。紅外光譜的結(jié)果顯示,藥物與載體間無明顯的相互作用；差示掃描量熱分析(DSC)、熱臺顯微鏡(HSM)、X-射線衍射(PXRD)等

3、結(jié)果顯示所制備的固體分散體中藥物均以無定型或分子狀態(tài)存在,而在物理混合物中則以結(jié)晶形式存在。以F127、F68及PS為載體制備的固體分散體在0.1％十二烷基硫酸鈉(SLS)中60min的累積溶出百分率超過90％,而以PVP為載體制備的固體分散體在0.1％SLS中60min的累積溶出百分率則低于70％。
　　 以水為溶出介質(zhì)時,PS/CyA固體分散體隨著PS/CyA比例的增大,60min藥物累積溶出百分率加大,當(dāng)PS/CyA比例超

4、過7:1時,藥物溶出速度不隨PS增加而加快,在此比例以上的固體分散體的累積溶出百分率均超過90％；而以F68、F127為載體制備的固體分散體在水中的溶出呈現(xiàn)倒鐘狀,表明這兩種載體對藥物的增溶作用有限,難以維持藥物溶出時的漏槽狀態(tài)。
　　 溶劑-熔融法制備固體分散體過程中的乙醇用量、攪拌速度、水浴溫度、粉體粒度在實驗范圍內(nèi)均不影響藥物的溶出度。最終確定制備條件為:4ml/g的乙醇用量、800rpm的攪拌速度、65℃制備溫度及80目

5、粉體。加入2％的微粉硅膠可顯著提高粉體的流動性。
　　 灌裝膠囊后,影響因素實驗的結(jié)果表明光、高濕及高溫均可使CyA固體分散體膠囊的有關(guān)物質(zhì)含量增加,其中高溫還會降低本品的溶出度,高濕(25℃、RH92.5％)條件下易吸潮變質(zhì),說明本品對高溫和高濕更加敏感,因此產(chǎn)品應(yīng)密閉防潮包裝,并在貯存時避免高溫。
　　 加速實驗及長期試驗結(jié)果表明,CyA膠囊經(jīng)雙層鋁塑復(fù)合膜包裝后,在40℃/75％RH條件下放置一個月,溶出度即顯著下

6、降,PXRD結(jié)果顯示藥物重新析出結(jié)晶。在30℃/60％RH放置六個月及在25℃/60％RH貯存十八個月基本穩(wěn)定。
　　 大鼠分別以1mg/100g的劑量灌胃給予CyA固體分散體與Neoral(R)后,兩者的血藥濃度-時間曲線相似,CyA固體分散體和Neoral(R)的各動力學(xué)參數(shù)如下:Cmax分別為2348.65±495.96和2557.38±555.09ng/mL；Tmax分別為2.00±0.67和1.71±0.67h、AUC

7、0-60分別為40283.99±5203.16和41021.10±6239.87 ng/mLh:MRT0-60分別為17.96±1.88和17.97±1.29h。CyA固體分散體的AUC為Neorai(R)的98.20％,表明CyA制成固體分散體后,大鼠口服后可有效地促進(jìn)藥物在胃腸道的吸收,達(dá)到與自微乳化制劑相似的吸收效果。
　　 健康志愿者單次口服CyA固體分散體膠囊與參比制劑自微乳化軟膠囊后,CyA固體分散體和Neoral(

8、R)的各動力學(xué)參數(shù)如下:Cmax分別為1500.3±348.8和1742.9±361.3 ng/mL；Tmax分別為2.63±0.55和1.39±0.49h；AUC0-24分別為7993.0±2535.1和8295.6±2295.6 ng/mLh；AUC0-∞分別為8851.7±2815.0和9258.0±2523.7ng/mLh；MRT0-24分別為6.48±1.15和5.76±1.04h。兩者的AUC-24、AUC0-∞、Cmax具

9、有生物等效性。Tmax經(jīng)Wilcoxon sign檢驗,試驗制劑與參比制劑在統(tǒng)計學(xué)上有差異(P<0.01),試驗制劑的達(dá)峰時稍晚。
　　 大鼠在體腸回流結(jié)果表明,CyA在十二指腸、空腸和回腸的吸收之間無顯著性差異(P>0.05),明顯優(yōu)于結(jié)腸(P<0.01),說明CyA在小腸段吸收較好。在實驗濃度范圍內(nèi),藥物累積吸收量與CyA濃度呈正比,說明藥物吸收為被動擴(kuò)散過程,提高藥物在胃腸道中的溶解度有利于藥物吸收。降低回流液中Na+濃度

10、,單位面積藥物的累積吸收量無顯著性差異,表明藥物吸收為非Na+依賴。相同濃度的新山地明與固體分散體溶液回流后,藥物的累積吸收量之間無顯著性差異,再次證明兩種制劑的吸收程度相似。
　　 采用人肝微粒體,考察了PS對CYP1A2,CYP2A6,CYP2D6,CYP3A4各酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)PS對CYP1A2,CYP2A6,CYP2D6和CYP3A4均有一定的抑制作用,且均隨PS濃度的增大,抑制作用加強(qiáng)。抑制CYP1A2,CYP2A6

11、,CYP2D6和CYP3A4酶活性50％所需PS的濃度(IC50)分別為0.3705,1.942,1.005和0.6585mg/mL。PS對各酶抑制作用由大至小分別為CYP1A2、CYP3A4、CYP2D6和CYP2A6。表明PS在體內(nèi)可能抑制CYP3A4而增加CyA的吸收。
　　 不同濃度的PS均可顯著提高P-gp底物羅丹明123(R123)細(xì)胞內(nèi)攝取量和腸腔側(cè)(A側(cè))至基底側(cè)(B側(cè))的轉(zhuǎn)運量,同時顯著降低R123從B側(cè)至A側(cè)

12、的排放量(P<0.05)。且均在PS為150μg/mL時作用最大。
　　 不同濃度的PS均可顯著降低DPH的各向異性,增加細(xì)胞膜的流動性(P<0.05)。且隨著PS濃度的增大,對膜流動性的影響作用加強(qiáng)。60min后細(xì)胞膜流動性基本不再隨時間而改變。去除PS后,細(xì)胞膜流動性均在30min內(nèi)快速回復(fù),表明PS是安全的,對細(xì)胞膜流動性的影響是可逆的過程,不會給細(xì)胞帶來永久的損傷。
　　 PS在考察時間和考察濃度范內(nèi)內(nèi)均不消耗細(xì)