斑馬魚毒性微量模型的建立及其在海洋天然產(chǎn)物篩選評(píng)價(jià)中的應(yīng)用.pdf

1、海洋特殊的生態(tài)環(huán)境賦予海洋生物豐富的物種多樣性和化學(xué)多樣性。海洋動(dòng)物,特別是海綿、珊瑚等海洋無(wú)脊椎動(dòng)物在激烈的生存競(jìng)爭(zhēng)中演化形成了有效的化學(xué)防御機(jī)制,產(chǎn)生的各種次級(jí)代謝產(chǎn)物具有魚毒、克生、抗生物污著、殺蟲、抑藻、抗菌等化學(xué)生態(tài)效應(yīng),同時(shí)也是創(chuàng)新藥物研究和開發(fā)的寶貴資源。如何有效利用海洋藥用生物資源發(fā)現(xiàn)真正有研究開發(fā)價(jià)值的藥物先導(dǎo)化合物,一個(gè)關(guān)鍵性的重要環(huán)節(jié)就是化合物的安全性評(píng)價(jià)。目前常用的哺乳動(dòng)物模型難以進(jìn)行大規(guī)模操作,耗時(shí)長(zhǎng),耗資大。

2、而斑馬魚具有個(gè)體小、體外發(fā)育、高繁殖力、胚胎光學(xué)透明等優(yōu)勢(shì),為實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程提供了極大的便利,已逐步成為藥物篩選評(píng)價(jià)領(lǐng)域的新寵兒。本研究建立了斑馬魚毒性微量模型,試圖為藥物發(fā)現(xiàn)和化學(xué)生態(tài)學(xué)研究提供雙向模型。利用建立的模型,對(duì)分離白海綿、珊瑚及其共附生微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了篩選,對(duì)化合物的毒性和化學(xué)生態(tài)學(xué)活性進(jìn)行了評(píng)價(jià),探討了該模型在藥物安全性評(píng)價(jià)和海洋天然產(chǎn)物的化學(xué)生態(tài)效應(yīng)評(píng)價(jià)中應(yīng)用的可行性。
　　 斑馬魚毒性微量模型中,利用

3、斑馬魚Danio rerio,取受精卵,在24孔板上,孵化一定時(shí)間,考察待測(cè)物的毒性和活性。利用倒置顯微鏡觀察胚胎發(fā)育至72h內(nèi)的形態(tài)學(xué)變化,選擇卵凝結(jié)、死亡、無(wú)自主運(yùn)動(dòng)、心率異常、延遲發(fā)育、延遲孵化、尾部畸形、脊索畸形和形體畸形等為觀察指標(biāo)。對(duì)所建模型的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性等進(jìn)行了考察。
　　 運(yùn)用所建立的模型,對(duì)分離自海綿、珊瑚及其共附生微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物(134個(gè)化合物)的毒性和活性進(jìn)行了篩選評(píng)價(jià),并初步探討了化合物的

4、構(gòu)效關(guān)系。發(fā)現(xiàn),在甾體類化合物中,24-縮酮甾體和孕甾酮類化合物較其他類型的甾體化合物對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育過(guò)程有較大的影響；在倍半萜類化合物中,多數(shù)奠類倍半萜和部分沒(méi)藥烷型倍半萜表現(xiàn)出明顯的毒性；在二萜化合物中,brianane型二萜的活性普遍較低,而含呋喃環(huán)的二萜類化合物則表現(xiàn)出明顯的毒性；在二倍半萜中,scalarane型二倍半萜的活性普遍較低；多數(shù)微生物來(lái)源的聯(lián)苯醚類化合物表現(xiàn)出不同的致死、亞致死和致畸的毒理學(xué)終點(diǎn)；部分聚酮類化合物表