過氧化物酶體增生物激活受體-γ激動劑治療糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的研究.pdf

1、目的:觀察過氧化物酶體增生物激活受體-γ(peroxisomeproliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)激動劑羅格列酮(Rosiglitazone)對鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導的早期糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)大鼠視網(wǎng)膜上核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)的表達和對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retina

2、l ganglion cells,RGCs)凋亡的影響,進而從分子學水平上闡明PPARγ激動劑對DR的保護作用,為預防及早期治療DR提供一種新的思路。
　　 方法:選擇90只健康的雄性Wistar大鼠隨機分為三組:正常對照組(C組)、DR+Rosiglitazone組和DR組,每組大鼠各為30只。進一步將每組大鼠分為4w、8w和12w三個時間點進行觀察,每個時間點觀察10只大鼠。采用一次性腹腔注射50mg／kg STZ的方法建立

3、糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠模型,72h后尾靜脈測血糖,若空腹血糖超過16.7mmol／L者視為造模成功。自DM模型成模后第3天起,DR+Rosiglitazone組大鼠每天給予羅格列酮3mg／kg灌胃,C組和DR組每天給予等體積的0.9％N.S灌胃。分別于給藥后4w、8w和12w處死各組大鼠,處死前測各組大鼠的血糖和體重,然后摘除眼球,剔除角膜和晶狀體制成眼杯(大鼠的玻璃體極少),制作石蠟切片,采用HE染色觀察

4、大鼠視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)情況,采用免疫組化的方法檢測大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65蛋白的表達,采用TUNEL法測定大鼠視網(wǎng)膜上RGCs的凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)。各指標均采用均數(shù)±標準差((x)±s)表示,多組間的均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間的多重比較采用q檢驗(Student-Newman-Keuls)法,以P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:(1)大鼠視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學觀察:通過HE染色觀察各

5、組大鼠視網(wǎng)膜組織發(fā)現(xiàn),C組大鼠視網(wǎng)膜組織在光鏡下分為10層,各層排列有序、層次分明,各層中的細胞均完整無水腫,RGCs無溶解；而DM大鼠視網(wǎng)膜組織各層排列紊亂、松散,各層中的細胞排列紊亂,并出現(xiàn)細胞水腫、腫脹,且在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層發(fā)現(xiàn)有RGCs溶解。(2)4w、8w和12w不同時間點各組大鼠的血糖和體重:DR組和DR+Rosiglitazone組大鼠血糖均明顯高于C組(P<0.01)；而DR+Rosiglitazone組大鼠血糖較DR

6、組略有降低,但兩者差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。DR組和DR+Rosiglitazone組大鼠的體重均較C組降低(P<0.05)；而DR+Rosiglitazone組大鼠體重較DR組變化不大,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)4w、8w和12w不同時間點各組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65的表達:在實驗各時間點,C組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65弱表達或無表達；在4w、8w和12w不同時間點,DR組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65

7、表達的積分光密度(Integral optical density,IOD)值分別是35.62±2.99、67.59±2.23和85.62±3.55,DR+Rosiglitazone組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65表達的IOD值分別是33.94±2.40、59.58±1.06和73.7±2.32。與C組相比,DR組和DR+Rosiglitazone組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65的表達均明顯增強(P<0.01),且該變化呈時間依賴性；在

8、8w和12w時,DR+Rosiglitazone組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65的表達較相同時間點的DR組明顯降低(P<0.01),而在4w時,DR+Rosiglitazone組大鼠視網(wǎng)膜上NF-κB p65的表達較相同時間點的DR組降低不明顯(P>0.05)。(4)4w、8w和12w不同時間點各組大鼠視網(wǎng)膜上RGCs的凋亡指數(shù):在實驗各時間點,C組大鼠視網(wǎng)膜上未見凋亡的RGCs或僅見少量的RGCs凋亡；而隨著病程的延長,DR組大鼠RG

9、Cs的凋亡指數(shù)逐漸增加,在4w、8w和12w時,RGCs的凋亡指數(shù)分別是(11.00±1.24)％、(27.98±1.71)％和(42.86±1.71)％,均明顯高于C組(P<0.01)；在4w、8w和12w時,DR+Rosiglitazone組大鼠RGCs的凋亡指數(shù)分別是(5.32±0.95)％、(16.92±1.35)％和(23.64±1.12)％,均明顯高于C組(P<0.01),但與DR組相比則明顯降低(P<0.01),且隨著給藥