色素上皮源因子通過PI3K-Akt通路和PPARγ降低骨水泥單體對(duì)心肌細(xì)胞的毒性作用.pdf

1、目的：研究色素上皮衍生因子(PEDF)對(duì)骨水泥單體(甲基丙烯酸甲酯，MMA)導(dǎo)致的大鼠胚胎成心肌細(xì)胞系H9c2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠胚胎成心肌細(xì)胞系H9c2細(xì)胞，在不同時(shí)間以不同的劑量MMA作用于H9c2心肌細(xì)胞，觀察MMA對(duì)H9c2心肌細(xì)胞的毒性作用。PEDF預(yù)處理H9c2細(xì)胞，觀察PEDF對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。采用CCK-8法檢測(cè)MMA在不同劑量、不同時(shí)間干預(yù)H9C2細(xì)胞后的生存率。以Annexi

2、nⅤ-FITC/PI對(duì)細(xì)胞熒光雙染色，用流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞，確定被作用的H9c2細(xì)胞在不同時(shí)間（2h和24h）的壞死或凋亡。以2'，7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(2'，7'-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA)分子探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平;以超氧化物歧化酶SOD試劑盒、丙二醛MDA試劑盒分別檢測(cè)MMA作用后細(xì)胞的氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)。以

3、蛋白免疫印跡(Western blot)檢測(cè)相關(guān)蛋白（PPARγ、Akt、caspase-3、Rip-3和bcl-2）的表達(dá)或活性變化。
　　結(jié)果：①CCK-8檢測(cè)顯示，MMA作用H9c2細(xì)胞2h和24h，可降低細(xì)胞生存率；②熒光雙染后流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡形態(tài)觀察顯示，干預(yù)2h，MMA組細(xì)胞死亡形式主要為壞死，PEDF預(yù)培養(yǎng)+MMA組壞死顯著減少(P＜0.05);干預(yù)24h，MMA組細(xì)胞死亡形式主要為凋亡，與MMA組比較，PED

4、F預(yù)培養(yǎng)+MMA組細(xì)胞凋亡顯著減少（P＜0.05）；③DCFH-DA檢測(cè)ROS結(jié)果顯示，干預(yù)2h和24h，MMA組ROS水平均顯著升高(P＜0.05)，與MMA組比較，PEDF預(yù)培養(yǎng)+MMA組都ROS顯著降低(P＜0.05)；④SOD和MDA檢測(cè)結(jié)果顯示，與MMA組相比，PEDF能顯著增加SOD的活性，減少M(fèi)DA的含量（P＜0.05）；⑤Western blot測(cè)定結(jié)果表明，干預(yù)24h，MMA組上調(diào)cleaved caspase-3、p

5、-bcl-2、Rip-3的表達(dá)，下調(diào)p-Akt1(S473)、PPARγ的表達(dá)(P＜0.05);與MMA組相比，PEDF+MMA組cleaved caspase-3、p-bcl-2、Rip-3表達(dá)顯著降低，p-Akt1(S473)、PPARγ表達(dá)顯著增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴MMA導(dǎo)致H9c2細(xì)胞凋亡和細(xì)胞程序性壞死，降低H9c2細(xì)胞的存活率；⑵PEDF預(yù)處理H9c2心肌細(xì)胞可減少M(fèi)MA導(dǎo)致的H9c2心肌細(xì)胞的凋亡及程序