木犀草素通過PI3K-Akt信號通路促進缺血-再灌注心臟和心肌細胞收縮-舒張功能的恢復.pdf

1、目的：觀察木犀草素(luteolin， Lut)對離體缺血/再灌注心臟和心肌細胞收縮功能的恢復及凋亡的影響。以心功能、心肌梗死面積、酶學、單個心肌細胞的收縮功能、凋亡蛋白、抗凋亡蛋白以及收縮相關蛋白的表達為指標，研究木犀草素對缺血/再灌注損傷大鼠心肌細胞的保護作用及其機制，從而為臨床治療心肌缺血/再灌注損傷提供一種新的藥物。
　　 方法：
　　 1．清潔級成年雄性SD大鼠，分為正常對照組（Control, n=6），缺血

2、/再灌注損傷組(I/R, n=6)，木犀草素預處理組(I/R+Lut， n=6)，木犀草素+LY294002預處理組（I/R+Lut+ LY, n=6）。離體心臟連接Langendorff裝置，待心臟穩(wěn)定30min后：Control組離體心臟持續(xù)灌流200min； I/R組離體心臟持續(xù)灌流50min后，再缺血30min復灌120min； I/R+Lut組離體心臟持續(xù)灌流20min，進行木犀草素預處理30min后再缺血30min復灌120

3、min； I/R+Lut+LY組進行木犀草素預處理前用LY294002預處理20min，余處理同I/R+Lut組。同時檢測大鼠離體心功能的變化；各組復灌10min時，留取冠脈流出液待測LDH含量。冷凍心臟，測量各組心臟的心肌梗死面積。
　　 2．進一步酶解法分離正常雄性SD大鼠心臟，得單個心室肌細胞，并進行培養(yǎng)。Control組心肌細胞正常孵育18h； I/R組心肌細胞正常孵育13h后，行缺氧3h復氧2h模擬缺血/再灌注；I/R

4、+Lut組心肌細胞正常孵育1h后加入2，4，8,16μmol/L不同濃度的木犀草素進行預處理12h，再行缺氧3h復氧2h模擬缺血/再灌注損傷。I/R+Lut+LY組進行木犀草素預處理前用LY294002預處理1h，余處理同I/R+Lut組。最后測定這些細胞在異丙腎上腺素刺激(isoproterenol， ISO)狀態(tài)下收縮幅度，收集各組心肌細胞，Western blot檢查bcl-2、bax、Akt、p-Akt、SERCA2a、PLB及

5、p-PLB蛋白表達變化。
　　 結論：
　　 1．在離體器官水平上，與正常組相比較，缺血/再灌注能夠明顯地降低離體心功能的各種參數(shù)，增加冠脈流出液中LDH的釋放量，增加了心肌梗死面積。而木犀草素可減輕心肌損傷，改善大鼠心功能，減少LDH的釋放，降低心肌梗死面積，而用PI3K抑制劑LY294002預處理后上述保護作用部分被阻斷。
　　 2．在細胞水平上，與正常組相比較，模擬缺血/再灌注顯著降低了心肌細胞收縮幅度，降

6、低了凋亡相關蛋白bcl-2的表達，增加了bax的表達，使得bcl-2/bax的比值降低，同時降低了收縮相關蛋白p-Akt、SERCA2a及p-PLB蛋白的表達。用不同濃度的木犀草素預處理后能夠不同程度地抑制細胞收縮幅度的降低，增加了bcl-2/bax的值，增加了收縮相關蛋白的表達，而用PI3K抑制劑LY294002預處理后上述保護作用部分被阻斷。
　　 結論
　　 1．木犀草素可促進大鼠離體缺血/再灌注心臟和心肌細胞收縮